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作詞：hazy 作曲：hazy 編曲：hazy 唄：鏡音リン 翻譯：ralianw（不當之處請指教！） 正吹著的輕風 撫摸著這臉頰 若知道了安樂的意義 就簡單地醒來吧 那流動的云的去處 就是我們要去的地方吧 那無休止的明天的前方 就是我們要去的地方吧 無聲的雨落下 打濕了那臉頰 若知道了啟程的意義 就簡單地入睡吧 那流動的云的去處 就是我們要去的地方吧 那無休止的明天的前方 就是我們要去的地方吧 驕傲綻放的花兒搖動著 做了鮮明的夢 一成不變的日子不斷重複著 我們做夢了 那流動的云的去處 就是我們要去的地方吧 那無休止的明天的前方 就是我們要去的地方吧
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作曲：L.ベガ １５７５０円(ニューサウンズ) これは、1950年代の前半、日本ですさまじいばかりのマンボブームをまき起こす先駆けとなった曲です。 作曲者のペレス・プラードは、いわゆるマンボ音楽の創始者で、この他にも「闘牛士のマンボ」「エル・マンボ」などの 超ミリオンセラーを次々と世に送り出しました。ラテン音楽には、ルンバ、サンバ、チャチャチャなどがあり、 鮮明で小気味良いリズムがその特徴です。キューバ生まれのマンボもその仲間です。
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作詞：ムスカP 作曲：ムスカP 編曲：ムスカP 歌：鏡音レン 翻譯：kankan 一回神 雨音已經消失 雲間 害羞的太陽 雨後的天空 鳥兒飛翔 向那 高遠青藍 綿延的天空盡頭 一直 Try to catch!! 收集許多顏色 束在一起 來畫 彩虹拱橋吧 Try to touch!! 黑白景色 發出光芒 脫下襪子 光腳起跑 向這耀眼的天空 起飛 一回神 影子已經變長 遠方地平線 將消失的太陽 茜色天空 一隻綠色小鳥 突然 不可靠的 降落 Try to catch!! 許多的相會中 你發出光芒 你看 絕不只有你自己 Try to fly!! 像要超越那彩虹般 高高起飛 仰望的天空 一顆星星 引導 將迷惘的心 I can feel... 聽到了 你的歌聲 在遠方微弱的 可是 很鮮明的響著 Try to catch!! 眾多的旋律 發出光芒 我們的和聲 散佈在夜空中 互相響應 化作七色彩紅
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オペレーション・デイブレイク ウイング/ターンA編 OPERATION O-5 白 3-5-0 R (自動A)：自軍プレイヤーの、場、手札、ジャンクヤードにある、全てのカードの指定国力は、白 国力に変更される。 例え紫だろうと指定国力を白に変えてしまう夢のあるカード。 デュアルカードは指定国力の増減ができないだけであって、このカードで指定国力を変えてしまえば、どんなデュアルカードも打ち放題になる。 不鮮明な旗色はこのカードがハンガーを対象に取っていないことを、補完するカードだと考えられる。
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807 名前：名前が無い程度の能力 投稿日：2006/11/13(月) 08 09 01 [ nKwKGWBw ] 東方紅楼夢の帰りの夜行バスで見た夢なんだが パチュリーとチクタクバンバンやってて交互に1個ずつマスを動かして落とした 方が1枚ずつ脱ぐという脱衣ゲーになってた しかも肝心の時計の方がえらい早く動きやがるので1分もしないで1試合のケリがつくと いう代物 お互いだいぶヤバイとこまでいってるところまでは覚えてるのだがその先が 不鮮明のまま降りる新宿についてしまった・・・・ 覚えれてない自分が憎い！ 現実 のんびり
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日程：2011年10月8～10日 場所：釧路町、釧路市 一回戦 Lose はれるや 42 － 116 釧路市役所 初の遠征・初のクラブ選手権で惨敗でした。 市民大会から負けが込んで雰囲気もよくありませんでしたが、今回の試合で弱い部分が明確に、強いチームの試合を見た事でこれからの目標が鮮明に見えたと思います。 勝っても負けても課題はあるはずです。学生の時みたく毎日集まれないなりにやり方もあるはず。周りのチームは考えて練習しているはずです。 必ず強くなって、来年のクラブ選手権で力試しを！！！
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情報サイト おそらく日本で一番詳しく扱っているサイト http //www.voynich.com/ ギャラリー イェール大学ベイニッケ図書館によるギャラリー(マイクロフィルムによる鮮明な画像を見ることができます) http //beinecke.library.yale.edu/digitallibrary/ (直リンがだめみたいなので"voynich"で検索) Wikimedia Commons http //commons.wikimedia.org/wiki/Voynich_manuscript
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せんめい【登録タグ nwnw せ 曲 蒼77】 作詞：nwnw 作曲：nwnw 編曲：nwnw 唄：蒼77 曲紹介 蒼77生誕祭参加楽曲 歌詞 （動画歌詞より転載） 壊れた ペン先に 震えたまま乗せる 要らない僕を残す 言葉と 旋律を 洗っても落とせない 穢れが付いた箱を 皆 持っているんだと 騙って 捉まえて 混ざって 澄み 澱んで 濁る 心が 感情が 叫んで 求めて 這って 乞う 『唯の弱虫。』 誰か 僕を呼んで 僕は 何時までも 言葉を待っている 「ズット 孤独ノ 中デ」 自分の意識さえ 言葉が邪魔をして 要らない僕の姿を 鮮明に写して 幾つもの本性 隠し通せずに 流れに沿っていく 奥底に 黙って 耐えて 澱んで 濁る 心も 感情も 振り切って 払い除けて 問う 「僕は弱虫？」 誰か 僕を呼んで！ 僕は 何時までも 言葉を待っている 「ズット 孤独ノ 中デ」 コメント 名前 コメント
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ZONE ゾーン ZONE ( ゾーン ) LBX-144 [DVD] ■基本情報 型番 LBX-144 発売元 株式会社ジャスティ 販売元 株式会社ファインディスクコーポレーション ■商品仕様 音声 ロシア語(ステレオ)DOLBY DIGITAL 字幕 日本語(ON/OFF不可) 映像 MPEG2、カラー アスペクト比率 16 9 ビスタ ディスク 片面・1層 ピクチャーレーベル いいえ ジャケット印刷 鮮明 特典映像 無し 備考 無し ■作品情報 原題 SPORES 製作国 ロシア 本編 75min. キャスト監督 マクシム・ダチュック 脚本 マクシム・ダチュック 製作 ディナ・グリン 撮影 マクシム・ダチュック 編集 出演 ナタリア・リビャコーワ、オレグ・ブルラコフ etc ■関連リンク allcinema IMDb
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他のページへ 実験ノートへ戻る Protocols Procedure トップページ メニュー メモ AgaroseGel hight = 120 mm @ 36 ppi DGGE Gel hight = 280 mm @ 36 ppi 071002; psbAプライマーを使ったDGGE解析の条件検討 Reference 不明 Protocole 不明 Condition 不明 Samples KH0605,1-9(Stn. .......) DGGE image Comment;Kataoka [バンドA;赤色] Aで示した3本のバンド(赤色)は目的の2本鎖DNAではない可能性がある。1本差DNAと考えられる。これは、長時間の電気泳動したときにこのバンドの停止位置が変性剤濃度によらないことから確認済。 [バンドB;青色(一部)] ウェルのかたちを反映したバンドの形状からしてこちらも、目的のDNAかどうかは不明。 [バンドC;緑色(一部)] このバンドが目的のバンド。 Cyanobacteriaのプライマーセット(CYA351-CYA781)で得られたパターンと類似している。得られる塩基配列に期待が持てる。 ただし、(1)バンド位置がゲルの上部に偏っていること、(2)バンドが太いことに関して検討が必要。 [対策] (1) 一番最初の条件検討としては変性剤濃度勾配の幅が狭い。0-50%の濃度幅で試すことが必要。 (2) (1)を行うことで解決する可能性がある。 全体的にバンドがシャープではなく、バックグラウンドが高い。 下記のPCR産物のAGP(Agarose Gel Electrophoresis)のバンドの濃さから考えて過剰にapplyされているためにDGGEに最適な解像度が得られていないと考えられる。AGEの濃さと16µLと言うことから考えて(600ng以上かも知れない...)、DGGEの解像度を得るには過剰である。apply量が多い場合にDGGEの解像度が悪くなる例は下記の参考実験を参照。 AGEの画像解析からPCR産物のDNA濃度(ng/µL)を推定し、段階的に希釈したPCR産物でDGGEを行うことで最適なapply量を決定できる。 非特異的に増幅されたPCR産物(特に750bp以上の断片)がDGGEのゲル上部のスメアの原因 AGE check Condition 1xTAE,Aga=1.5%,time=40min,Et-Br,stain=30min,destain=10min photo; degital camera(filter=UV red,mode=AE, Tv=1, Av=8.0, 測光方式=評価測光, ISO=400, 焦点距離=5.4mm) Samples KH0605,1-9(Stn. ...不明...),2µL each Marker=1µL each Comment;Kataoka 増幅されたバンドについて 750bpの位置にバンドがあるので目的のpsbA遺伝子領域を増幅できていると考える。 750bp以上の増幅が大きいことから、PCRによるartifactの増幅が多い。 バンドの濃さについて マーカーと比較して750bpのバンドが太く濃いことから、PCRによる増幅は飽和していると考えられる。また、ゲル最下部のプライマによる陰が僕の経験と比べても濃いように思う。 以上のことから、genomeにprimerが着く反応に加えて、genomeもしくは増幅されたPCR産物のprimerサイト同士が着くことでartifactを形成しているかも知れない。 [対策] 750bp以上のサイズの非特異増幅産物が見られること。750bpバンドが濃い(太い)ことから考えてPCRによる増幅は過剰であると考えられる。 非得意的な増幅を避けるために、PCRサイクル数を減少させることで750bp以上のサイズのバンドが減少することが期待できる。 (Ishii and Fukui 2001; Applied and Environmental microbiology 2001 p3753-3755) 過剰のprimerが残存しているがDGGEへの影響は不明。もしかしたら過剰のprimerはPCR反応中にartifactの原因となるかもしれない。(ただし、推測の域を出ない) primerの量を減らすことでartifactの可能性を減らすことができる。 anniling温度を下げることでprimerのannilingが相対的に増加し、目的の遺伝子部位を増幅する効率が上がるかもしれない。 参考データ(operated by Tak) 変性剤能動勾配によってバンド位置の決まらない1本鎖DNAと思われるバンドのDGGE中での動き。 1〜8時間、時間差でDGGEをすると赤矢印以外のバンドは最適な変性剤濃度勾配の位置で停止するが、このバンドは止まらない。 (primer=EUB341F-GC-907R,25-45%DN,6%AA) DGGEにapplyするDNAの質量(ng)によるバンドの見え方の違い。 400ngのレーンAは濃く太いバンドが見られる。現れた他のバンドも太くバックグラウンドも高い。 150-75ngに最適値がある。50ng以下ではバンドとして検出されないものの方が大きくなる。 レーンB〜Dは同一サンプル、レーンAのみ異なるサンプル。 (primer=EUB341F-GC-907R,6%AA) 071004; PCR conditionの検討 [psbAプライマーを使ったDGGE解析の条件検討] 目的 PCR conditionを変更して、DGGEに最適なPCR産物を得る。 071002と比較して、condition変更の成果を確かめる。 Condition変更点 不明 AGE check Condition 1xTAE,Aga=1.5%,time=40min,Et-Br,stain=30min,destain=10min photo; degital camera(filter=UV red,mode=AE, Tv=1, Av=8.0, 測光方式=評価測光, ISO=400, 焦点距離=5.4mm) Samples KH0605,1-9(Stn. ...不明...),2µL each 左から、071004PCRed{No.2,4,6,8,10,12,14,16,18},M,071002PCRed{No.2,4,6} Marker=1µL each Comment;Kataoka PCR conditionを変更することで、071001?(右、3 lane)と比べて、鮮明なバンドパターンが得られるようになった(lane2,4,10,12,14,18)。 lane6,7,16では高分子量の影が見え、さらに、目的とするバンドも太い(オレンジの矢印)。 PCR増幅効率の違いは、サンプルの違いによるものと考える。 DGGEの同一ゲル上で比較する場合はPCR conditionも同じにしておかないと、PCRによる影響が環境の違いを超えてしまう(PCR bias)ので比較することができない。 [対策] PCR conditionをもう少し検討して、非特異配列が得られたサンプル(オレンジの矢印)で鮮明なAGEバンドを得る。 [ちなみに....] 「不明」と書いてあるところを埋めて下さい Mupidの比較実験はしていません。Meetingでも言いましたが昨日の結果から、電気泳動は支障ないと考えられます。おそらく、マーカーが原因 昨日の結果を見せて下さい。 PCR productsのPCR増幅を揃えないとDGGEによる比較はできませんが、時間が無いようでしたら「apply量」と「変性剤濃度幅」の試験は今日のサンプルを使ってできると思います。 DGGEの電圧と泳動時間を変えることについて。条件は「200V,4h,x0.5 TAE」を基本プロトコルとして行いたいと考えています。詳細は後日伝えますが、もし、DGGE分解能が足りないときにのみ試しましょう。 071009; PCR conditionの検討 [psbAプライマーを使ったDGGE解析の条件検討]-apply量とDN濃度幅の検討- 071002のDGGEから(1)高バックグラウンドと(2)不適切なDN濃度幅(狭い)であったので、DNAのapply量を減らす(1)、DN濃度幅を広げる(2)ことで改善を図った。 DGGE image Condition 1xTAE,AA=6%,time=4 h,Syber gold,stain=?? min,destain=?? min photo; degital camera Samples KH0605,1-9(Stn. ...不明...) 左から、07100x PCRed{No.2,4,6,8,10,12,14,16,18},47〜100 ng Comment;Kataoka DNA apply量 100ngに減らすことでより鮮明なバンドパターンが得られた。 各レーンで揃えることで、サンプル(Stn.)間の違いが見やすくなった。 レーン6,8,16がスメアであるが、これらのサンプルはAEPでも高分子量領域にスメアな影が見える結果と対応しており、PCRによるartifactであると考えられる。 apply量を減らすことでノイズと考えられた、071002-DGGEの青矢印で見られた影が消えた。 一本鎖と思われたバンドが消え、バンドパターンの鮮明さが改善された。僕の経験からもapply量が過剰であればあるほど一本鎖と考えられるバンドの影が邪魔になります。これは、最適DN濃度を持たない一本鎖は分子量により泳動されるのでDN濃度勾配によって分散しないためと考えています。 DN濃度幅 バンドの位置が全体的に下がり見やすくなった。ただし、ゲル上部にバンドの様な影が見えることからDN 0-80%で一度試しておく良いかもしれない。 一本鎖と思われたバンド(赤矢印)は泳動条件(time,buffer,AA濃度)が変わらないので、DN濃度が変わったのにも関わらず、ほとんど同じ位置にあります。 一方、緑矢印で示したバンドは変性剤の濃度幅が変わったことに対応してゲル下方へ移動しています。 [対策] 100ngでもバンドがぼやけており、まだ、DNA量が多いかも知れません。100,75,50,25...ngと段階的に変化させてみることで適切な量が分かるかもしれません。 AEPで見る限りPCRは良くなってきました。しかし、バンドがぼやけるのはDGGE condition(buffer濃度,AA%)とPCR condition(非得意的増幅,増幅領域)両方の可能性があります。とりあえず一つずつ解決していきましょう。引き続きPCR AEPのバンドが全てのサンプルで一本になるように条件検討を続けて下さい。 [ちなみに] 1xTAEで実験をしていますが、200V,4hでDGGEをするときは0.5xTAEで行うようにして下さい。他の実験と比較するため。 クランプを締めすぎたからと言って、バンドが不鮮明になることはありません。不鮮明な理由は上記のことが考えられます。 AGE check Condition 1xTAE,Aga=1.5%,time=40min,Syber gold;stain= ?? min,destain = ?? min photo; degital camera Samples KH0605,1-9(Stn. ...不明...),2µL each 左から、M,071004PCRed{No.2,4,6,8,10,12,14,16,18},M Marker= 1?? µL each [ちなみに] Gel 1とGel 2の違いを教えて下さい。ゲルやサンプルを少しくらい放置していてもコンタミが無い限り結果に影響はありません。Gel1とGel2の両方ともとても綺麗な結果だと思います。 Syber goldでも綺麗な写真が撮れるようになったね。どうやったか教えて下さい。 Markerが不鮮明なのはMarkerに問題がありそうです。例えば、薄めることが悪いとか。。。