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質問対策 だいたいこんなもの? こんなかんじ。 こんなかんじ。 FLIMに最低限必要なこととは? 1.80MHzのパルスレーザー 2.高感度の光電子増倍管 3.ナノ秒オーダーで蛍光寿命を取得するハードウェア 脂質とプローブの関係はどうなっているのか? 普通培養細胞は、1plくらいだと考えられています。 スパインの中は0.1flから0.01flくらい 大体、100倍くらいだと考えられます。 大体、DAGは、1fモルです。一細胞に。 だから、10あぷとモルくらいある。(この計算はおかしい。神経の場合、スパインは特別だと考えられる) PIP3の場合は、その100倍くらい少ないから。100ゼプト盛るくらいあります。これが、刺激によって10倍くらいに変わるといわれています。 脂質プローブと脂質の結合能は、かなり高いですから、始めから結合していると考えられます。ここで、刺激が加わると、破壊分析の結果などを参考にしますと10倍から最大で50倍くらいの脂質ができます。これに、プローブが反応して応答するということになります。これは、プローブ全部を応答させるための量く シグナル伝達に関わるタンパク質は、タンパク質は、数十個あると言われている。よって、それに応答するPIP3も同様にそのレベルあるのではないかと推測します。プローブ分子は膜タンパク質で、蛍光を見ればわかるとおり、極めて量は少ないです。タンパク質の発現量は10-6Mくらいですから、スパインの容量が0.01flくらいだとすると、大体数十個くらいあると考えられます。よって、PIP3、プローブが大体数十個くらいずつあると想定してもらえれば大丈夫です。普通のPMTではなく、Gasp detectorを用いて観測しております。 1. In this presentation, you don t mention SHIP protein. How do you think SHIP protein is involved in this pathway? Thank you very much for good question. Exactly, SHIP is the protein that degrades PIP3 to PI(3,4)P2. I did not examine the effect of SHIP on spinule formation. Some paper shows that SHIP is not expressed in HP. Anyway it is very interesting to know the effect of SHIP on spinule formation. 1.0 How did you analyze spinule formation? It is pretty difficult that as you know spinule is very fine structure. So it is pretty difficult to observed. In our study we used the hamahoto H7422 Gasp detector. Spinules that protruded from the spine head were counted. Each synaptic spinule, regardness of its size and orientation, was scored as in previous studies (Tao-Cheng et al., 2009) And we did analyze the circularity. The effect of PTEN inhibitor, which increses PIP3, reduced the circularity. In the case of PI3K inhibitor, which decreases PIP3, there was the tendency that circularity increases but no significant difference. 1. 1. PIP3 or PIP2? very good question. This study is in the middle of revise. Reviewer pointed out about this point. I am looking for the protein of downstream of PIP3 such as Akt protein. And basically PIP2 is 100 times more than PIP3. even though PIP3 increase or decreases, PIP2 level is not reflected. So I think that PIP3 is the factor to regulate spinule formation. 1. 2. The relationship between schizophronia and PIP3 Inositol metabolism is deeply related to the depression and bipolar disorder. Because old days drug lithium is well known to work this pathway. currently it seems that lithium effects the GSK3beta. And PTEN mutant causes coden disease, which is accompanied by sometime mental reterdation. So PIP3 and inositol metabolism is related to the disease like these. But I think there is mainly two cause inositol metabolism regulates such a diseases. One is that PIP3 regulates the neuronal development in develop brains. The other is synapse function after neuron grown up. In the present study, I examined the effect of PIP3 on spine morphology. In near future, I want to examine the effect of PIP3 on neuron development. In some part, Dr. sheng reveal that PIP3 regulates the dendritic arborization though. 1.3 How about the mobility of PIP3 側方拡散lateral diffusion is roughly 1 microm/sec. But Dr. Kusumi shows that there is some barria mechanism which prevent the lateral diffusion of lipids. The molecules is surrounded by the fenses the size is 30 to 200 nm. So we cannot say that PIP3 is easily do the lateral diffusion. 1.4 PIP3 and raft Basically PIP3 fatty acid composition is steroyl and arachidonyl. 1.5 Did you try RNAi for PI3K and PTEN I tried PTEN RNAi. But I don t analyzed yet. 1.6 Did you check the decrease in PIP3 in the presence of PI3K inihibitor? Yes, I did it. I observed PIP3 reduction and increase in the presense of PI3K and PTEN inhibitor respectively in this figure. In the presence of PI3K inhibitor, PIP3 decrease more in spine than dendritic shaft. In the presence of PTEN inihibitor, PIP3 increase more in dendritic shaft than spines. Previously several paper shows that PTEN is localize in the dendritic shaft. Also some paper showed that PI3K is localized in spines and dendrites, but PI3K directly binds to AMPA receptors, leadting to PI3K activation. This data answers that why PIP3 is accumulated in the spines. 2. In the middle of glutamate uncaging, is PTEN related to this decrease? At first, I expect that PIP3 decrease during glutamate ungaging is due to PTEN. But I examined the effect of PTEN inhibitor on PIP3 decrease during glutatate uncaging. There is no obvious difference with or without PTEN inhibitor about PIP3 decrease. So I think this decrease of PIP3 is mainly due to menbrane insertion. 3. PTEN is dual phosphatase? Did you remove the possiblility PTEN phosphatase activity works in this pathway? Exactly PTEN has dual phosphatase activities. burabura. 4. PIP3 is involved in the functional plasticity? and structural plasticity? As I showd in introduction, there is no doubt that PIP3 regulates functional plasticity. 5. Does PIP3 regulate spinule length? Actually PIP3 regulates the number of spinule. But the length of spinule is not regulated by PIP3. 6. Explain the FLIM more. 7. What is the strength of FLIM compared to FRET? Previously I developed the ratiometric FRET probes including PIP3 and DAG probes. In the case of ratiometric-based FRET probe, in the thick tissues like hippocampal slice, wave-dependent fluorescence absorabance is gonna happen. We cannot measure appropriate FRET efficiecy. So I newly developed the florescence lifetime-based probe. Fluorescence lifetime never change even though thick tissues. That is the strength of FLIM. 8. PI3K works in the middle of glutamate uncaging? I did the experiment to see the effect of PI3K inhibitor on PIP3 concentration during glutamate uncaging. But there is no significant difference between with or without PI3K inhibitor. This means that enzymatic induced PIP3 is extremely little compared to dilution of PIP3 which is caused by membrane insertion. But if we want to observe more detail PIP3 dynamics which is caused by the PI3K or PTEN during glutamate uncaging, I plan to do this experiment as follows. At first I make the situation that spine size doesn t change even during glutamate uncaging using cytokarasin and catrunculin, which is inhibitor for actin polymerization. In this situation I am gonna measure the PIP3 increase or decerase. So I can observe real PIP3 change not induced by membrane insertion. 9. What is the down stream pathway of spinule formation? 10. What is the most difficult point for this work? How did you take over this problem? 11. What number of PIP3 is there in spine? Rough caluculation is 10-100 number of PIP3. How about the number and length of spinule ? raft and PIP3. my probe is subjected with palmitoyl and farnesyl modification. Recently raft proteins clustering regulate the localization of N-Ras. At least I get the response of FLIMPA3 in culture and neurons. The important proteins including PI3K is localized in raft. So PIP3 also localized in raft. But it is very interesting to discriminate the PIP3 production or reduction in raft or non-raft. 神経細胞の樹状突起には約1万個のシナプス結合があります。人が記憶する前と後で、脳の中で何かが変わっているはずです。実際、シナプスで電気の通り方などが変化することから、この一つ一つのシナプスは記憶の最小素子だと考えられています。故に、個々のシナプスの特徴を知ることは、記憶のメカニズムを探る上でとても重要です。個々のシナプスは、入力をうける神経細胞から別々に入力を受けるので、独立に働いていると考えられる一方、クロストークという減少もあります。これは、一つのシナプスに入力が起きたときに、隣接するシナプスに影響を及ぼし、隣接するシナプスで入力を受けやするするということであります。 スパインがクロストークすることはどのような意義があるのでしょうか?りんごというものを覚えたとしましょう。そのときにあるシナプスが活性化し、その付近のシナプスとクロストークします。そのときに、りんごの性質、あかい、おいしいなどの情報が近くに入力しやすくなれば、今度思い出すときに、効率がよいと考えられる。シナプス間のクロストークは、このような思考の分子レベルでのモデルとなるのではないか?と考えております。 クロストークを引き起こす因子として、従来からいろいろな因子が報告されてきました。一酸化窒素、アラキドノイルグリセロールなどの因子は、細胞膜を超えて、隣のシナプスのシナプス前膜に作用するなどの報告がありました。2007年にラスたんぱく質が樹状突起を通って、隣のシナプスに作用することが報告されました。私は、このシナプス間のクロストークに関わる因子の一つとして、脂質シグナルがあるのではないかと考えました。脂質シグナルは、シナプス前膜からグルタミン酸が放出されるとシナプス後膜のグルタミン酸受容体が活性化し、PIP2からホスホリパーゼCによって、DAG,PI3KによってPIP3が産生されます。DAGは、神経細胞の分化などに関わるシグナル、PIP3は、アポトーシスに関わるシグナルを制御することが知られています。 脂質シグナルだと考える根拠は、脂質シグナルは、ラスたんぱく質の上流に位置すること、特にPIP3は、グルタミン酸などの刺激入力を受けた後、分解されずに数時間持続することが知られ、1秒間に0.5マイクロメートル側方拡散され、隣接するシナプスに到着することができるからです。この結果、この脂質シグナルが、隣接するシナプスに移動し、隣接するシナプスに入力を受けやすくなるのではないかと考えました。 では、どうやってこの脂質シグナルを測るかですが、従来までの脂質シグナルの測定法は、破壊分析に頼っていたために、一個一個のシナプスの個性を失っていました。そこで、生きた神経細胞で見るために、私が現在までに開発したFRETプローブ分子を用いようと考えております。このプローブの特徴は、2つあります。1つは、脂質結合ドメインを変えることによって、様々な脂質を見ることができること。従来までに、DAGおよびPIP3のプローブを作ってきました。2つ目は膜に局在していることです。従来までに、脂質を見るためのプローブ分子として、GFPと脂質結合たんぱく質の融合プローブがよく使用されている。脂質が細胞膜で増加した際、プローブ分子が膜に移行することによって増加を確認できる。しかしながら、スパインおよび樹状突起は細胞体とつながっており、脂質プローブがスパインまたは樹状突起の膜に移動した際、細胞体にあるプローブがスパインに流れ込み、バックグランドのノイズとなる。申請者のプローブ分子は、膜に局在しているために、バックグランドがないため、スパインおよび樹状突起での脂質の動態を見るために優れている。これは、脂質シグナルをシナプスにおいて観察することができる能力を有しております。 実験においては、この作製した脂質FRETプローブを海馬スライスに遺伝子銃によってトランスフェクションします。次に、詳細は省きますが、自作の2光子顕微鏡を用いて、神経細胞を観察します。図のように樹状突起およびスパインが観察されます。 次に、プローブを発現した神経細胞のひとつのシナプスを刺激します。顕微鏡下で、神経細胞はこのように観察されます。2004年にひとつのシナプスを刺激する方法が開発されました。まず、グルタミン酸前駆体をインキュベートします。一つのシナプスの近傍に光刺激を行うと、この限られた範囲でグルタミン酸が産生され、シナプスが刺激されます。これによって、脂質のシグナルがどのように起きるのかを観察します。また、図を観察すると刺激を受けたスパインだけ大きさが大きくなっていることがわかります。シナプスはある一定以上の強さの入力を受けることで、このように大きさを変えます。これは、このシナプスがこの入力を記憶したということを示しています。申請先研究室では、このシステムをいち早く取り入れ、80%以上の確率でシナプスサイズを変えることが可能であります。 そこで、一年目では、2光子顕微鏡のセットアップを行う。それと同時に、PIP2,DAG,PIP3のプローブ分子をFLIMプローブに変える。 2年目では、一つのシナプスを刺激し、脂質シグナルがどの程度、どのくらい樹状突起まで伸びていくのかなどの、基本的な情報を得ます。時間的には、グルタミン酸産生に伴い脂質シグナルが活性化しPIP2は、基質であるために、減少し、DAGおよびPIP3は増加すると考えられます。しかしながら、DAGは破壊分析の結果から一過性、PIP3は、持続すると期待できます。 2年目は、脂質シグナルが届くシナプスと届かないシナプスに刺激を与え、光刺激がどの程度の刺激の強さで、スパインの大きさが変わるかを調べます。 脂質シグナルが届く範囲のスパインは、より弱い光刺激で大きくなるのではないかと期待します。 次に、脂質の移動を止めるために、セプチンたんぱく質を強制発現します。発現します。このたんぱく質は、図のようにスパインネックに発現します。緑がGFPセプチン、赤は神経細胞の形状のマーカーです。セプチンは3nmほどのたんぱく質でこれらがオリゴマーを形成し、スパイン脂質の移動を阻害します。この状態で、一つのシナプスを刺激します。すると脂質の移動は阻害されますから、隣接するスパインの大きさの変わり方は、遠くのシナプスと変わらないのではないかと推測できます。 この実験によって、脂質シグナルがシナプスのクロストークに必要であるかを検証します。 本研究では、 申請者が現在までに培ってきた脂質の知識 および蛍光プローブ分子を現所属研究室に導入する 現研究室にある2光子顕微鏡グルタミン酸光分解システムを用いる。 スパインにグルタミン酸刺激を与えたときに、 脂質分子のスパイン内および樹状突起上での広がりを観察する 脂質分子の移動を阻害することで、脂質シグナルが、隣接するシナプスにどのように影響を及ぼすのかを探っていく MIT時代には何をやってきたのですか? クロストークをとめたら連想がとまった。 脂質シグナルをとめたら連想することができなくなった。 個々のシナプスで引き起こされるシグナルは、シナプス内で留まることも予想されるが、近年、一つのスパインの変化が、隣接するスパインに影響を及ぼすことが報告されている 従来までのシナプスでのシグナル伝達を調べる方法としては、シグナル伝達の阻害剤と電気生理的手法を用いた結果が主であり、一万個存在するシナプスの総和から得られた情報である。 How much does enlargement of spine happen? How much does lipid second messenger is there? Is it right to tell lipid signaling as controller of signal? What is the function of septin? Septin is discovered in1971 in budding yeast mutants defective in cell-cycle progression. If you overexpress the septin, not only lipids but also the protein, which localize in membrane, is stopped by the septin, right? I need to prepare the septin, which have mutant ATP binding site or mutant enzyme activity delation mutant. You should learn the mechanism the pathway until producing lipid second messenger. ラフトによって、もっと上流のたんぱく質は動くことがないのではないか? Gたんぱく質はそるブルだから大丈夫。しかし、Gbrは膜局在型。代謝型グルタミン酸受容体はどのGたんぱく質を活性化するのか?また、PLCデルタ、PLCβは泳ぐが大丈夫か? 脂質の組成がミックスしないようにたんぱく質がバリアを作っているということは結構ある。らてらるとばそらてらる。 でんどらいとにのみ発現しているようなたんぱく質はないだろうか? What size is lipid? ゴーシュ型でC-C 1.513; C-H 1.112 Å アンチ型でC-C 1.511C-H 1.112 Å 大体DAGは5Å, 10Å PIP3は10Å, 10Å PTEN, DGKをノックアウトしたらどのくらいまで伸びるのか? どれくらい脂質は産生するの? 本当に脂質はシグナルの司令塔なの? 西塚先生を出す。 デイビッドホロビンを出す。 脂質って細胞膜からどれくらい出ているのか?PIP3だったら15nm以上は出ていると思う。 もし、始めから脂質の移動が阻害されていたらどうする? 確かに、CaMkIIはスパインでのみ活性化されることが知られている。 しかし、Rasは結構長く伸びることが知られている。 脂質の移動を阻害するものの有力なものとして、セプチンがあげられるのですが、エンドジーニアスなセプチンもあります。ただ、結構、すべてのスパインネックに存在しているわけではなく、もしかしたら、脂質の移動を変えるような働きをしている可能性があります。クロストークに選択性があるということでとても面白いということになります。 脂質シグナルをスパインで見ることの重要性。 何故、スパインが記憶の最小素子となるのか? 何故あなたは脂質シグナリングを選んだのか? 1.脂質シグナルは移動することができるシグナルの最上流である。 2.脂質シグナルの特にPIP3シグナリングはしばらくの間持続する。 PKCの局在を見てみるとデンドライトでも起きている。やっぱり脂質は移動していると考えられる。 実は、かれるによって、らすシグナルが閾値の上昇に必要だということがわかっている。しかしながら、何故ラスなのか?実は、ラスはPIP3の下流なんですよね。 PTENの局在。 DGKの局在。DGKはカルシウムによって活性化されるが、神経細胞でのカルシウムの上昇は瞬時である。 これによって、あるシグナルに反応しやすくなるようになり、ある反応に応答するシナプスクラスターができるのではないだろうか。 シナプスのクロストークに脂質シグナリングが関係していなかったら? 脂質修飾のメカニズムについて。 PIP2の局在は?下の論文にあるように恐らく均一に存在する。 しかし、結局のところ活性化されたグルタミン酸受容体がどこにあるかが重要でさらに、活性化したPI3KとPLCがどこにあるかによる。 Neuroscience Letters 423 (2007) 158–161 もしかするとPLCやPI3Kがデンドライトまで泳いでいって、PIP2を代謝することはないのか? 恐らくないと思う。その根拠は、代謝型グルタミン酸によって活性化されるPI3Kはp110rだと考えられます。 このたんぱく質は、脂質修飾を受けているたんぱく質とコンプレックスを作っている。 もしかしたら他の脂質修飾されていないようなたんぱく質がPIP3を作る可能性があるかもしれないよ。 そしたら、それは、わかりません。ただ、ここで重要なのは、PIP3ができて、それが樹状突起を移っていくことが観察できればいいのだと考えております。 PI3kは1,2,3型が存在する。そのうちPIP2を基質とするものは、I型だけである。一般的なI型のA型は、チロシンリン酸型受容体によって、活性化される。一方、I型のB型は、p110γであり、これは、Gたんぱく質共役型受容体によって活性化される。Brとアダプターたんぱく質のp101と複合体を形成する。このため、かなり移動度が遅いと考えられる。よって、PIP3のような低分子の方がかなり早く動けるのではないかと考えております。 よって、PIP3の量は、PTENとPI3Kのバランスで決まっている。しかし、 PIP3を作り出す刺激は、グルタミン酸受容体だけなの? いえ、恐らく他にもあるとかんがえられます。しかしながら、今回絞っているのはグルタミン酸受容体だけです。 DGKはどこにいるの?細胞質中にいますが、DGKは、9つのアイソフォームがあって、α、βは、PSD結合ドメインを持っていないが、γ、ζはもっている。基本的に、デンドライトシナプスにいるが、後者は、PSDに濃縮されている可能性もある。 別にあなたのプローブじゃなくてもサイトゾルプローブで赤と緑比較してできるんじゃないの? 実は、それでは難しいです。というのは、仮に、フレットプローブと膜局在プローブが培養細胞などで100%応答した場合どちらも、最高の状態となります。しかし、神経細胞においては、デンドライトと繋がっていますから、さらに、プローブが入ってしまうわけです。すると、膜局在方はこの赤と緑がバックグランドとなって、感度が小さくなってしまうということがあげられます。よって、FRETプローブの方が応答はよいであろうと考えら得ます。 mGluRによって活性化されるPI3Kとして、IB型が挙げられる。これは、Gbrによって活性化される。 ちなみに、NMDA依存的にPIP2が減少する系も存在する。これには、2つの可能性が挙げられる。PLCが泳いでいった。もしくは、樹上突起にも受容体が多少なりとも存在し、それが活性化した。しかし、今調べたいのは、スパインから産生された脂質分子であるから系が全く違うと考えられる。 PIP3は、様々な方法で産生されると考えられる。スパインにはチロシンキナーゼ受容体EPH受容体なども存在するだろう。だから、PIP3が産生されるメカニズムはたくさんあると考えられる。しかしながら、今回はグルタミン酸受容体を考えているからそれによって活性化されるのは、代謝型グルタミン酸受容体だと考えられる。 もしかすると、brが移動するかもしれない。しかしながら、脂質とGたんぱく質どっちが移動が早いかというと、grの方が大きいから移動しづらいと考えられる。 Rasの活性化は、11microm//4 minである。とても遅い。結局、上流のシグナルがどうなっているかについての情報は何も与えないことになる。 クロストークを行うと何がいいのか? スパインネックが見えないんだけれどどういうこと?本当にくっついているの? 何分後に刺激をするの? どんな点が困難だと考えられるのか? 逆に、スパインで制限されたらどうするの? 答。もちろん計画を立てるときには一番面白い作業仮説をたてるわけであります。それはそれで面白いと考えられる。その一つとしてセプチンが上げられます。 普段から脂質はセプチンによって抑えられているんじゃないの? セプチンは、細胞質のたんぱく質の拡散も防ぐんじゃないの? それは、GFPを発現させてホトブリーチすればよい。 それを調べるためには、セプチンRFPを発現させて本当にセプチンが阻害するかを調べればよい。 スパインの大きさってどれくらい? シナプスのクロストークにプラスマイナスはあるのか? タイトルはゴシックにする。 申請者の利点はちょっと変えるべき。 何故FRETを使うか?理由を述べる、 脂質シグナルをわからせる 10出たものが拡散してしまうと3になってしまう。それでよいのか? セプチンの情報 あるセプチンは、PIP2などとくっついて膜のbracingを起こす。Septin-mediated uniform bracing of phospholipid membranes. Tanaka-Takiguchi Y, Kinoshita M, Takiguchi K. Curr Biol. 2009 Jan 27;19(2) 140-5. DiIは分裂溝を通る。 ただ、Dilは細胞膜の表面に入ることから表側である可能性が高い。 細胞膜の成分をミックスしないで、そのまま分けるという役割を持っているたんぱく質の一つにセプチンというたんぱく質があります。セプチンは、主に細胞分裂の際に分裂溝にセプチンリングを形成し、細胞分裂に必要なたんぱく質です。また、細胞膜上の成分をミックスしないようにしているからです。 ですので、 スパインのコンパートメントについて カルシウムは、シナプスで制限される。 CaMKIIも同様に制限される。 しかしながら、Rasたんぱく質は制限されずに、クロストークに必要である、ただ、ラスたんぱく質は、カルシウムシグナリングによって活性化される。LY PTENの局在について 基本的に、PTEN is preferentially expressed in neurons and is especially evident in Purkinje neurons, olfactory mitral neurons, and large pyramidal neurons. To analyze the function of PTEN in neuronal differentiation シングルセルでは、核と細胞質中に存在することがわかっている。 1.神経細胞には、樹状突起上に約1万個のスパインがあります。人が記憶する前と後で、脳の中で何かが変わっているはずです。実際、このスパインは大きさをダイナミックに変えることから、一つ一つのスパインは記憶の最小単位だと考えられています。故に、個々のシナプスの特徴を知ることは、記憶のメカニズムを探る上でとても重要です。 2.神経細胞において、脂質シグナルは、記憶のモデルとなるシナプス可塑性と呼ばれる現象に必須であります。脂質シグナルは、シナプス前膜からグルタミン酸が放出されるとシナプス後膜のグルタミン酸受容体が活性化し、ホスファチジルイノシトール4,52リン酸、(PIP2)から(ジアシルグリセロール)DAG,ホスファチジルイノシトール3,4,53リン酸(PIP3)が産生されます。これらの脂質は、下流のたんぱく質を制御して、シナプス可塑性を引き起こします。 従来までの脂質の測定法は、破壊分析に頼っていたために、一個一個のシナプスの個性を失っていました。そこで、目的は、脂質シグナルを一つ一つのスパインで観察するということです。 3.申請者は、現在までに、蛍光共鳴移動FRETプローブ分子を開発しました。CFP, YFP, 脂質結合ドメインをαへリックスで連結します。プローブを膜局在シグナルで細胞膜に連結します。脂質が増えると脂質結合ドメインが結合し、グリシングリシンを中心にプローブが動き、CFPとYFPが近づきFRETが起きます。CFPとYFPの蛍光強度比から脂質の量を測定しました。培養細胞での脂質のそれぞれの膜での脂質の動態を明らかにしてくることによって、高い評価を得てきました。 4本研究では、直径1μmほどの微小空間での脂質の動態を調べることにチャレンジしてみようと考えております。直径1μmほどの微小空間においては、現在私の用いている蛍光強度比タイプのFRETプローブでは、YFPの光分解が激しく、蛍光強度比が一定しないという短所があります。そこで、蛍光寿命を測るためのプローブ分子に改良を行います。従来のプローブのCFPをGFPにYFPを蛍光を発しないYFPに変えます。蛍光寿命FRETプローブの特徴は、GFPの蛍光寿命で測定するために、GFPが光分解したとしても、ただ、蛍光強度がさがるだけで、蛍光寿命は変化しません。図のようにFRETが起きたときは蛍光寿命を表す直線の傾きが小さくなります。よって、微小空間でも精度の高いデータを取ることが可能となります。このFLIMを導入している研究施設は、世界でも3番目、日本ではうちが始めてです。 5.実験においては、この作製したFLIMプローブを海馬スライスに遺伝子銃によってトランスフェクションします。次に、詳細は省きますが、自作の2光子顕微鏡を用いて、神経細胞を観察します。 6.次に、プローブを発現した神経細胞の一つ一つのシナプスを刺激します。2004年に開発された、グルタミン酸アンケイジング法を用います。まず、グルタミン酸前駆体をインキュベートします。一つのシナプスの近傍に光刺激を行うと、この限られた範囲でグルタミン酸が産生され、シナプスが刺激されます。図を観察すると0分で刺激を受けた赤点のスパインが、大きくなっていることがわかります。シナプスはある一定以上の強さの入力を受けることで、このように大きさを変えます。これは、このシナプスがこの入力を記憶したということを示しています。申請先研究室では、このシステムをいち早く取り入れ、80%以上の確率でシナプスサイズを変えることが可能であります。本研究では、スパインの大きさを変えた際に脂質シグナルがどのように変化するのかを追っていきます。 7.一年目では、2光子顕微鏡のセットアップを行う。それと同時に、PIP2,DAG,PIP3のプローブ分子をFLIMプローブに変える。このプローブの特徴は、脂質結合ドメインを変えることによって、様々な脂質を見ることができることです。DAGのためにPKCC1Bドメイン、PIP3のために、GRP1のPHドメイン、PIP2のためにPLCデルタのPHドメインを結合してプローブを作製します。 2年目では、プローブ分子を発現させます。このプローブは、スパイン、樹状突起の細胞膜に局在します。グルタミン酸産生に伴い、基質であるPIP2は減少し、DAGおよびPIP3は増加すると考えられます。しかしながら、DAGは破壊分析の結果から一過性、PIP3は、持続すると期待できます。よって、空間的には、PIP3が樹状突起を移動していくのではないか?と推測します。 8.3年目は、樹状突起を進展する脂質シグナルが神経細胞の機能にどのように関わっているかを調べようと思っています。脂質シグナルは、隣接するスパインにも及ぶと考えられますから、何か、隣接するシナプスに影響を与えるのではないかと考えられシナプス間のクロストークなどを調べることがきるのではないかと考えます。例えば、近いスパインでは、遠いスパインに比べて、シナプス構造可塑性を引き起こすための、刺激の閾値が下がると期待できます。この際、樹状突起上に脂質の移動を阻害するようなたんぱく質を仕込むことで本当に脂質が関与しているかを調べようと考えております。 9.この研究において期待できること 現在、シナプスの入力へのパターンはわかっていません。クロストークが起きれば、Aいう入力やBという入力に対して、あるシナプスのクラスターができると考えられます。2007年にやっと、ラスたんぱく質のシグナリングがシナプス間のクロストークに関係することがわかるようになってきました。しかし、まだあまりにもわかっていることが少なすぎます。私の脂質の動態を明らかにすることで、脂質シグナルとシナプス間のクロストークの関係を明らかにし、記憶の基盤となる神経回路のパターンの解明を行う。 10. PIP3シグナリングは、1時間以上も続いているということ。これは、高頻度の電気刺激をおこなっってシナプス可塑性を誘導したときに、PIP3産生酵素PI3Kの阻害剤であるLY29を加えたときに、シナプス可塑性が阻害されるということからわかります。よって、脂質の速報拡散は、0.5μm・秒なので、十分に樹状突起を移動することができるということ。ラスたんぱく質のシグナルが樹状突起を介して隣のシナプスに移動し、スパインのシナプス可塑性の閾値を下げるということは報告されています。もちろん、脂質シグナルは、ラスたんぱく質の上流に位置しているわけですから、脂質シグナルがどのようにラスたんぱく質を制御しているかを調べることは興味深いと考えられます。 もう少し、クロストークの背景を教えてください。 NOやエンカンナビノイドなどについても含めて。 NOやエンカンナビノイドのクロストークは、NOやエンカンナビノイドが膜を超えることができて、これがシナプス前膜に作用して、隣接するシナプスへ影響を与えるというものであります。しかし、これらの研究は、専ら、電気生理学で行われており、本当に、隣接するスパインでのクロストークを見ているかについては全く、わかっておりません。 このように、シナプス前膜に作用するわけですが、シナプスのクロストークは何も前膜だけでなくて、シナプス後膜スパインで起きていてもよいわけです。近年、2008年にすぼぼだ博士が始めてRasシグナルが関与しているということを示しました。興味深いことにラスと脂質シグナルは結びついている。よって、脂質シグナルも何か関係があるのではないかと期待しております。 一つのスパインを調べることそんなに必要なの? 大事です。そもそも脳を研究する究極の目的は、脳を完全に理解することです。理解することができれば、それをターゲットとした薬も作ることができる。しかし、現在、記憶を担う記憶の回路については、ほとんどブラックボックスなのです。いきなり難しいことはできない。記憶の最小単位のシナプスがどのような回路パターンで振舞っているのかを調べることができれば、次の高次構造を調べることができる。さらに、神経細胞レベルで調べることができれば、もっと、神経同士のクロストークを調べることができます。だから、スパインでのいろいろな角度からの情報がほしいのです。だから調べることは意義があります。 クラスター化することってそんなに大事なの? これから調べるのでなんとも言えませんが、大事だと考えられます。 これは、ちょっと、大胆な仮説でありますが、例えばりんごという情報を記憶したとする。その時、周りのスパインにも影響を及ぼします。これによって、りんごに付随する情報、赤い、おいしいなどのものを近傍に入力しやすくします。すると、今度思い出すとき、神経回路にとって効率よく思い出すことができる。そのようなことを念頭に考えております。 このためには、例えば、これに脂質シグナルが関与するかを調べるためには、脂質シグナルを樹状突起上で阻害するような、マウスを作ってやって行動解析を行うことによって何か情報が得られるのではないか?もし、この実験でうまくいけば、そのようなことも可能だと考えられます。 カレルのパクリじゃないの? Rasシグナリングは、10マイクロメートル。ねいちゃーのやつも10マイクロメートル。 病気と脂質シグナルの関係は? 最近、報告された例は、2008年にアルツハイマー病に関与するAbたんぱく質を皮質一時神経細胞に加えるとPIP2の量を減らすことが報告された。これは、カルシウム依存的で、しなぷとじゃにんを発現していないラットでは、PIP2の起きないことがわかっている。よって、Abの影響は、しなぷとじゃにんを介してPIP2を減らすことで神経細胞の不全を起こしているのではないか?と考えています。ダウンシンドロームのモデルマウスでPIP2の量が減っているということも知られております。また、加齢マウスでは、PIP2の量が減っていることが知られて、PIP2の原料となる脂肪酸を加えるとPIP2が増えてさらにシナプス可塑性があがることが知られています。また、PIP3シグナルの下流のGSKたんぱく質が、加齢における記憶の再固定に関わっていることが、ノックアウトマウスを使った実験から明らかになっている。 FLIMに最低限必要なこととは? 1.80MHzのパルスレーザー 2.高感度の光電子増倍管 3.ナノ秒オーダーで蛍光寿命を取得するハードウェア 蛍光寿命についてもう少し詳しく教えてください。 蛍光体が励起光を受けると励起状態になります。ここでの滞在時間が蛍光寿命です。励起光が基の準位に戻るときには、3つの過程でもどります。発光遷移(光)、無放射遷移(熱)、蛍光共鳴エネルギー移動です。ここにあくせぷたーがあると、S1状態での蛍光体の滞在時間が短くなる。よって、蛍光寿命を表す減衰曲線が短くなります。 やることたくさんあるけれど、現実可能なのか? やるべきことの重要なポイントとしては。 1.2光子顕微鏡のセットアップ。およびグルタミン酸アンケイジングシステム。これは、MIT時代に習いましたので、単純に組み立てるだけです。 2.FLIMのセットアップ。これも、脂質プローブではありませんが、すでに、FLIMを取るためのノウハウはありますので、あとは、組み立てるだけです。 3.プローブ作りおよびその改良は、1年目で行えます。 4.一度、このようにFLIMが取れる設備が完了すれば、後は、とるだけですのでどのように研究を進めるかというアイディア勝負になると思います。ですので、多くは見えますが、1年あればセットアップはできます。 俺は、こうじゃなくてもいいんじゃない?という質問に弱い。 あと、今まで、考えたことがないようなことを聞かれると弱い。 だけど、これに関しては誰でも一緒。 次に、脂質の移動を止めるために、セプチンたんぱく質を強制発現します。発現します。このたんぱく質は、図のようにスパインネックに発現します。緑がGFPセプチン、赤は神経細胞の形状のマーカーです。セプチンは3nmほどのたんぱく質でこれらがオリゴマーを形成し、スパイン脂質の移動を阻害します。この状態で、一つのシナプスを刺激します。すると脂質の移動は阻害されますから、隣接するスパインの大きさの変わり方は、遠くのシナプスと変わらないのではないかと推測できます。 この実験によって、脂質シグナルがシナプスのクロストークに必要であるかを検証します。 ジーンがんの効率 これは、ばいおらっどとも話したのですが、まず、金粒子が入る確率および発現効率とも調べてないからわかっていないようです。そして、金が入ることによって、死んでしまう細胞も中にはあるかもしれないです。うまい具合に入ったものだけが光る。選択性は多少あります。しかし、この理由はわかりません。入った細胞だけが変なんじゃないの?その可能性は100%否定できるわけではありません。しかし、2つあって、一つは、われわれの用いているシナプス構造可塑性に関しては、問題がないこと。また、他の研究者もこれ以外に遺伝子を導入する方法はなく、これを使っていること。入った細胞だけ大きさが変わっているんじゃないの?実はというと、電顕でアンケイジングしたスパインを見たものがあります。やはり変わっていました。 それって、MITでやったことでしょ?そういうの出しちゃだめだよ。 2光子顕微鏡のメリットは?共焦点との違いは? 励起光が違う。 中まで到達することができる。紫外光による細胞ダメージはない。 ただ、スライスの表面などでは、共焦点でも細胞体は見ることが可能である。 ただ、ゆくゆくはねずみの頭などで行うには、共焦点では明らかに見えません。この理由は赤外光だから 2光子顕微鏡の分解能は、共焦点と同じくらいで200-300 nmくらい? しかし、z軸分解能はとても悪くなる。 また、実際には、うちのシステムは、共焦点ではできません。というのは、あんけいじんぐは、光分解を一点で行う必要があります。共焦点では、できない。 脂質とプローブの関係はどうなっているのか? 普通培養細胞は、1plくらいだと考えられています。 スパインの中は0.1flから0.01flくらい 大体、100倍くらいだと考えられます。 大体、DAGは、1fモルです。一細胞に。 だから、10あぷとモルくらいある。 PIP3の場合は、その100倍くらい少ないから。100ゼプト盛るくらいあります。これが、刺激によって10倍くらいに変わるといわれています。 脂質プローブと脂質の結合能は、かなり高いですから、始めから結合していると考えられます。ここで、刺激が加わると、破壊分析の結果などを参考にしますと10倍から最大で50倍くらいの脂質ができます。これに、プローブが反応して応答するということになります。これは、プローブ全部を応答させるための量く らいできます。 FLIMについてもう少し教えて? FLIMのメリットは?他にないの? 蛍光強度比フレットだと、YFPのスペクトルが漏れて、YFPも励起してしまう。あと、YFPの蛍光のCFPへの漏れこみも問題になってくる。 しかし、FLIMでは、YFPが消えているので問題ない。 現在は、場所をきちんと記憶できるようなステージがあるので、これを用いてシナプスの場所を特定して、アンケイジングを行って免疫染色を行うというのは不可能なのか? 答え。ポイントは、リアルタイムでとることができないということになるでしょう。2番目には、刺激前と後で比較を行うことができないということです。 あなたのプローブ本当にそのように働いているの? 例えば、グリシングリシンを除くとうまく働かなくなる。また、脂質局在ドメインを除いた細胞質プローブではうまくいかないなどの点から、確かに、このプローブのポイントとなるところがきちんと働いて脂質を検出していると考えられます。 現在、FLIMを行っている人の研究者はどれくらいいるの? 神経細胞ということで、FLIMの論文を出しているというところになると、3人ほど思い出します。一人目はハーバードのMGHで、アルツハイマー病のマウスやラットにおいて、カルシウムシグナルがどのように変化しているかを調べているぶらいあんばくすかい博士。しかし、この研究はシナプスではなく主に細胞体で調べております。次に、スパインレベルであると、かなり少なくて、かれるすぽぽだと、やすだりょうへい博士です。やすだ博士はかれるのぽすどくでした。近年、MIT時に林研で作製したCaMkIIプローブをFLIMに改良してCaMkIIの活性を調べて高い評価を受けたことは記憶に新しいです。 脂質の動態ということになると、培養細胞レベルでは、京都の松田先生が、私たちのプローブを用いて脂質の動態を観察しております。斉藤尚明先生がPKCの活性化を調べております。 Roバリューはどれくらい。50から60Åくらい。 2光子と共焦点の違い 実際、共焦点でもスライスくらいだったら神経細胞体のカルシウムイメージングなどは可能である。 今まで、細胞質タイプのプローブで見られていると思うけれどあれじゃだめなの? はい、まず大前提にあるのは、細胞質タイプのプローブで調べられているのは、神経細胞全体を刺激しているということ。そうすると、全体が刺激されるので、プローブの局在をみることができます。しかしながら、一点でグルタミン酸刺激を行うと、細胞質タイプでは見ることができません。何故かと言うとポイントは、バックグラウンドです。 どのくらいの長さイメージングするの?シナプス構造可塑性の実験では、大体一時間くらい。ですので、一時間くらい観察しようと考えております。 プローブの局在はどうなるの?私のプローブ分子には、N-rasの脂質修飾ドメインがついております。スパインおよび樹状突起です。 メカニズムは?ファルネシル基で小胞体に結合し、パルミトイル基で細胞膜に結合します。 昔の研究のぽいんとは? 私のプローブ分子の特徴は、2点あります。 それによって、図で示す。 透明YFPの原理? 蛍光は、蛍光体が高い順位から低い順位に移るときに起きます。 その際に、発光遷移のほかに、2つ影響を受けるものがあります。 一つは、無放射遷移、これは、熱によるもの。 2つめは、蛍光共鳴エネルギー移動。 透明なYFPの場合は、この無放射遷移で起きています。 この研究で困難だと思われるところはどこでしょうか? カルシウムシグナリングとの関係は? カルシウムによって、CaMKIIなどが活性化しシナプス可塑性を誘導します。阻害剤を加えた実験から、カルシウムシグナリングも脂質シグナルもどちらも、シナプス可塑性に重要であることがわかっています。しかしながら、カルシウムシグナリングは、スパインで留まることが知られています。よって、シナプスのクロストークはむしろ代謝型グルタミン酸受容体が関与しているのではないかと考えております。しかしながら、グルタミン酸受容体の下流の脂質シグナルは、カルシウムシグナリングに比べてほとんどわかっておりません。よって、調べるために意義のあることだと考えます。 岡本さんのFRETの図と安田さんの図 これすべて、すでにできているんじゃない? 簡単にできるんじゃないの? 確かに、2光子顕微鏡のセットアップ、アンケイジングシステムのセットアップ、FLIMの測定のノウハウは知っていますが、実際組み立てるのはかなり時間がかかります。あっという間に1年かかります。逆に言うとそれくらいじゃないと3年間では終わりません。 他に、どんなFRETプローブを作ったら面白いの? FLIMは本当に高感度か? シナプス可塑性ってどうやって測るの? MIT時代には何をやってきたのですか? 大きく分けて3つあります。2行使顕微鏡のセットアップのノウハウ。アンケイジング法のノウハウ。FLIMの測定のノウハウ。実際、私、昔脂質の研究を行っていまして、脳という新しい分野に挑戦するに当たって、脳のことほとんど知らなかったので、しかも、初めての海外ということで言葉は通じないし、林先生に朝から晩まで働かされるし、本当に大変でした。 FLIMとかだしちゃっておかしくない?書いてないよ? 2点ありまして、1点目は、申請書に書ききれなかったということ。 2点目は、私は、常に面白いアイディアを考えております。よって、面白いものがあれば、どんどんアップデートをしていきます。 何か、脂質シグナルがシナプスのクロストークに関係しているという証拠はあるの? 確定的な証拠はありません。間接的な証拠としましては、PIP3シグナリングは、1時間以上も続いているということ。これは、高頻度の電気刺激をおこなっってシナプス可塑性を誘導したときに、PIP3産生酵素PI3Kの阻害剤であるLY29を加えたときに、シナプス可塑性が阻害されるということからわかります。よって、脂質の速報拡散は、0.5μm・秒なので、十分に樹状突起を移動することができるということ。ラスたんぱく質のシグナルが樹状突起を介して隣のシナプスに移動し、スパインのシナプス可塑性の閾値を下げるということは報告されています。もちろん、脂質シグナルは、ラスたんぱく質の上流に位置しているわけですから、脂質シグナルがどのようにラスたんぱく質を制御しているかを調べることは興味深いと考えられます。 では、他に何か面白いテーマはないの? 確かに、PIP2は、シナプス前膜で調べられているので、ベシクル小胞が放出する際に、このプローブをシナプス前膜に導入しておいてどのような時に産生しているのかということを調べることは重要です。それよりも、私が興味を持っているところは、シナプス構造可塑性、つまり、シナプスが大きくなるときに、劇的に脂質の量が増えているわけです。短期間でのこの脂質の増加は、ちょっと信じられません。例えば、細胞分裂は5時間ほどをかけて1つが2つになるわけですが、この可塑性に関しては、1分以内に2倍以上になるわけです。この時、とんでもなく脂質代謝が動いていると想像できます。そのパスは2つあって、1つは、細胞膜で激しく脂質産生酵素が動いていること。もう一つは、トランスゴルジなどから激しく膜輸送が起きること。どちらかを調べることはとても面白いと考えております。 私は、常に、よくなるように考えております。ですので実験がよいと思えば変えます。本筋は外れておりません。 従来までのグルタミン酸を放出する方法。 バスアプリケーション。マイクロパフ。電気刺激 刺激はどのようにやっているの? 0.5Hz.2ms、1Hzなど。とにかく電気生理でシナプス可塑性が起きていれば大丈夫。 クロストークをとめたら連想がとまった。 脂質シグナルをとめたら連想することができなくなった。 How much does enlargement of spine happen? How much does lipid second messenger is there? Is it right to tell lipid signaling as controller of signal? What is the function of septin? Septin is discovered in1971 in budding yeast mutants defective in cell-cycle progression. If you overexpress the septin, not only lipids but also the protein, which localize in membrane, is stopped by the septin, right? I need to prepare the septin, which have mutant ATP binding site or mutant enzyme activity delation mutant. You should learn the mechanism the pathway until producing lipid second messenger. ラフトによって、もっと上流のたんぱく質は動くことがないのではないか? Gたんぱく質はそるブルだから大丈夫。しかし、Gbrは膜局在型。代謝型グルタミン酸受容体はどのGたんぱく質を活性化するのか?また、PLCデルタ、PLCβは泳ぐが大丈夫か? ラフトとPIP3の関係は? 確かに、ラフトみたいなところでできますが、物理的な面から言うと、ラフトは、比較的飽和脂肪酸を足に持った脂質がいるところです。PIP3,DAGの足は、ステロイルアラキドノイルなので、ラフトをでることはあながちおかしくないと考えられます。 脂質の組成がミックスしないようにたんぱく質がバリアを作っているということは結構ある。らてらるとばそらてらる。 でんどらいとにのみ発現しているようなたんぱく質はないだろうか? What size is lipid? ゴーシュ型でC-C 1.513; C-H 1.112 Å アンチ型でC-C 1.511C-H 1.112 Å 大体DAGは5Å, 10Å PIP3は10Å, 10Å PTEN, DGKをノックアウトしたらどのくらいまで伸びるのか? 本当に脂質はシグナルの司令塔なの? 西塚先生を出す。 デイビッドホロビンを出す。 脂質って細胞膜からどれくらい出ているのか?PIP3だったら15nm以上は出ていると思う。 もし、始めから脂質の移動が阻害されていたらどうする? 確かに、CaMkIIはスパインでのみ活性化されることが知られている。 しかし、Rasは結構長く伸びることが知られている。 脂質の移動を阻害するものの有力なものとして、セプチンがあげられるのですが、エンドジーニアスなセプチンもあります。ただ、結構、すべてのスパインネックに存在しているわけではなく、もしかしたら、脂質の移動を変えるような働きをしている可能性があります。クロストークに選択性があるということでとても面白いということになります。 脂質シグナルをスパインで見ることの重要性。 2光子顕微鏡のメリットとは? 共焦点でも、スライスでも見えるんじゃないの? 別に、2光子顕微鏡で見なくてもいいんじゃないの? 何故あなたは脂質シグナリングを選んだのか? 1.脂質シグナルは移動することができるシグナルの最上流である。 2.脂質シグナルの特にPIP3シグナリングはしばらくの間持続する。 PKCの局在を見てみるとデンドライトでも起きている。やっぱり脂質は移動していると考えられる。 実は、かれるによって、らすシグナルが閾値の上昇に必要だということがわかっている。しかしながら、何故ラスなのか?実は、ラスはPIP3の下流なんですよね。 PTENの局在。 DGKの局在。DGKはカルシウムによって活性化されるが、神経細胞でのカルシウムの上昇は瞬時である。 これによって、あるシグナルに反応しやすくなるようになり、ある反応に応答するシナプスクラスターができるのではないだろうか。 シナプスのクロストークに脂質シグナリングが関係していなかったら? 脂質修飾のメカニズムについて。 PIP2の局在は?下の論文にあるように恐らく均一に存在する。 しかし、結局のところ活性化されたグルタミン酸受容体がどこにあるかが重要でさらに、活性化したPI3KとPLCがどこにあるかによる。 Neuroscience Letters 423 (2007) 158–161 もしかするとPLCやPI3Kがデンドライトまで泳いでいって、PIP2を代謝することはないのか? 恐らくないと思う。その根拠は、代謝型グルタミン酸によって活性化されるPI3Kはp110rだと考えられます。 このたんぱく質は、脂質修飾を受けているたんぱく質とコンプレックスを作っている。 もしかしたら他の脂質修飾されていないようなたんぱく質がPIP3を作る可能性があるかもしれないよ。 そしたら、それは、わかりません。ただ、ここで重要なのは、PIP3ができて、それが樹状突起を移っていくことが観察できればいいのだと考えております。 PI3kは1,2,3型が存在する。そのうちPIP2を基質とするものは、I型だけである。一般的なI型のA型は、チロシンリン酸型受容体によって、活性化される。一方、I型のB型は、p110γであり、これは、Gたんぱく質共役型受容体によって活性化される。Brとアダプターたんぱく質のp101と複合体を形成する。このため、かなり移動度が遅いと考えられる。よって、PIP3のような低分子の方がかなり早く動けるのではないかと考えております。 よって、PIP3の量は、PTENとPI3Kのバランスで決まっている。しかし、 PIP3を作り出す刺激は、グルタミン酸受容体だけなの? いえ、恐らく他にもあるとかんがえられます。しかしながら、今回絞っているのはグルタミン酸受容体だけです。 DGKはどこにいるの?細胞質中にいますが、DGKは、9つのアイソフォームがあって、α、βは、PSD結合ドメインを持っていないが、γ、ζはもっている。基本的に、デンドライトシナプスにいるが、後者は、PSDに濃縮されている可能性もある。 別にあなたのプローブじゃなくてもサイトゾルプローブで赤と緑比較してできるんじゃないの? 実は、それでは難しいです。というのは、仮に、フレットプローブと膜局在プローブが培養細胞などで100%応答した場合どちらも、最高の状態となります。しかし、神経細胞においては、デンドライトと繋がっていますから、さらに、プローブが入ってしまうわけです。すると、膜局在方はこの赤と緑がバックグランドとなって、感度が小さくなってしまうということがあげられます。よって、FRETプローブの方が応答はよいであろうと考えら得ます。 mGluRによって活性化されるPI3Kとして、IB型が挙げられる。これは、Gbrによって活性化される。 ちなみに、NMDA依存的にPIP2が減少する系も存在する。これには、2つの可能性が挙げられる。PLCが泳いでいった。もしくは、樹上突起にも受容体が多少なりとも存在し、それが活性化した。しかし、今調べたいのは、スパインから産生された脂質分子であるから系が全く違うと考えられる。 PIP3は、様々な方法で産生されると考えられる。スパインにはチロシンキナーゼ受容体EPH受容体なども存在するだろう。だから、PIP3が産生されるメカニズムはたくさんあると考えられる。しかしながら、今回はグルタミン酸受容体を考えているからそれによって活性化されるのは、代謝型グルタミン酸受容体だと考えられる。 もしかすると、brが移動するかもしれない。しかしながら、脂質とGたんぱく質どっちが移動が早いかというと、grの方が大きいから移動しづらいと考えられる。 Rasの活性化は、11microm//4 minである。とても遅い。結局、上流のシグナルがどうなっているかについての情報は何も与えないことになる。 クロストークを行うと何がいいのか? スパインネックが見えないんだけれどどういうこと?本当にくっついているの? 何分後に刺激をするの? どんな点が困難だと考えられるのか? 逆に、スパインで制限されたらどうするの? 答。もちろん計画を立てるときには一番面白い作業仮説をたてるわけであります。それはそれで面白いと考えられる。その一つとしてセプチンが上げられます。 普段から脂質はセプチンによって抑えられているんじゃないの? セプチンは、細胞質のたんぱく質の拡散も防ぐんじゃないの? それは、GFPを発現させてホトブリーチすればよい。 それを調べるためには、セプチンRFPを発現させて本当にセプチンが阻害するかを調べればよい。 スパインの大きさってどれくらい? シナプスのクロストークにプラスマイナスはあるのか? タイトルはゴシックにする。 申請者の利点はちょっと変えるべき。 何故FRETを使うか?理由を述べる、 脂質シグナルをわからせる 10出たものが拡散してしまうと3になってしまう。それでよいのか? セプチンの情報 あるセプチンは、PIP2などとくっついて膜のbracingを起こす。Septin-mediated uniform bracing of phospholipid membranes. Tanaka-Takiguchi Y, Kinoshita M, Takiguchi K. Curr Biol. 2009 Jan 27;19(2) 140-5. DiIは分裂溝を通る。 ただ、Dilは細胞膜の表面に入ることから表側である可能性が高い。 細胞膜の成分をミックスしないで、そのまま分けるという役割を持っているたんぱく質の一つにセプチンというたんぱく質があります。セプチンは、主に細胞分裂の際に分裂溝にセプチンリングを形成し、細胞分裂に必要なたんぱく質です。また、細胞膜上の成分をミックスしないようにしているからです。 ですので、 スパインのコンパートメントについて カルシウムは、シナプスで制限される。 CaMKIIも同様に制限される。 しかしながら、Rasたんぱく質は制限されずに、クロストークに必要である、ただ、ラスたんぱく質は、カルシウムシグナリングによって活性化される。LY PTENの局在について 基本的に、PTEN is preferentially expressed in neurons and is especially evident in Purkinje neurons, olfactory mitral neurons, and large pyramidal neurons. To analyze the function of PTEN in neuronal differentiation シングルセルでは、核と細胞質中に存在することがわかっている。 一人目の先生が、免疫染色でPIP3の進展は確認されているの?という質問をしてきた。俺は、前に佐々木とそのことについて話していたにも関わらず、うまく説明することができなかった。結局、リアルタイムで取れることが大事だという風に言ってしまったが、そうじゃない。本当の答えは、シナプス構造可塑性を起こしたスパインを、一度視野からはずして、免疫染色して見るというのは極めて不可能に近いということである。そのように答えないと正解とはいえない。今考えてみると、ちょっと、彼も不思議そうな顔をしていた。
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Chronos(鬼) 曲名 アーティスト フォルダ 難易度 BPM NOTES/FREEZE その他 Chronos TAG X3 鬼15 128 542 / 48 STREAM VOLTAGE AIR FREEZE CHAOS 96 85 49 39 107 楽譜面(4) / 踊譜面(8) / 激譜面(12) / 鬼譜面(15) 属性 発狂(カニ歩き、同時踏み、リズム難)、渡り、ひねり、変拍子 譜面 http //eba502.web.fc2.com/fumen/ddr/x3/chronos_8s.html 譜面動画 https //www.youtube.com/watch?v=om6Y4gAeE4I (x2.5, NOTE, Clap) http //www.nicovideo.jp/watch/sm16770081 http //www.nicovideo.jp/watch/sm16770081 (x3.5?, NOTE, Clap) プレイ動画 http //www.youtube.com/watch?v=61f8HWu259A 解説 エンジョイレベル45で解禁(X3)。ギタドラV6からの移植で、BGVもギタドラと同じもの(全画面)が使われている。 BPM128の16分をひたすら踏み続ける譜面。配置は素直で交互に取りやすい。 その一方で、変拍子ゆえにリズム難の要素を持つ。リズム自体は曲に合っているので、曲を聴きこむとスコアが伸びやすくなる。 休憩後、1小節半ほど同時踏み地帯がある。 一箇所16分の中に同時を踏ませるところがある。 -- 名無しさん (2011-12-16 12 22 32) 変拍子のせいでリズムが狂いやすいが、配置そのものは素直で最後の長い滝意外に15に匹敵する要素なし。 -- 名無しさん (2011-12-27 00 25 40) 交互踏みがスムーズにできないと難しくなる。 -- 名無しさん (2012-01-23 17 47 39) 16分の入り乱れたリズム難ではあるが、基本的に音合せかつ踏みやすい配置。踏む速度そのものは足15の中でもかなり遅いので、発狂配置慣れに向いてるかもしれない -- 名無しさん (2015-04-11 22 22 17) 名前 コメント コメント(私的なことや感想はこちら) 早く踏みやすいので、引きつけて踏むといいかも。 -- 名無しさん (2011-12-08 02 05 38) VANESSAの練習譜面に。BPMは異なるが。 -- 名無しさん (2011-12-11 09 50 34) 判定が変な感じがするが俺だけか・・・ -- 名無しさん (2011-12-19 00 29 47) なんだかリズムがムズイ。問題なければ3.5倍が楽かもよ!? -- 名無しさん (2011-12-24 18 22 13) 入り足と拍数覚えてHS4.5かなぁ、足15ではパラ鯖クレイジーに次いで鳥Aまでなら出しやすい部類 -- 名無しさん (2011-12-25 20 41 29) 動画1 42の2P→から中央FAにかけてコンボを切りやすいが左足で2P→から入ると交互に踏めるので安定しやすい -- 名無しさん (2012-02-13 16 00 45) ノンバーで4.5はできる? -- 名無しさん (2012-04-25 01 11 45) バーをもっても4.5倍は速いかと… -- 名無しさん (2012-05-12 11 43 21) 15弱レベル? -- 名無しさん (2013-01-26 05 28 15) SPなら5.5(バー有り)にする時あるけど流石にDPだとバー有りでも4~4.5倍かな。でもバー無しで3.5くらいで配置も素直だし踏みやすい15弱 -- 名無しさん (2013-08-19 18 30 38) リズム難ではあるけど基本的にメロディ通りなので、曲を聴き込むのが攻略への近道かも -- 名無しさん (2014-04-24 20 30 45) BPM128と考えると最高にリズム難。BPM85.33の3連符譜面と考えれば決して難しいリズムではない。。 -- 名無しさん (2014-04-24 20 53 08) 名前 コメント PV http //www.nicovideo.jp/watch/sm19999807 http //www.nicovideo.jp/watch/sm19999807
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Eames Design The Work of the Office of Charles and Ray Eames John NeuhartMarilyn NeuhartRay EamesCharles Eames Chicka Chicka Boom Boom Bill MartinJohn Archambault?Ray Charles?Lois Ehlert? Eames Furniture Journal (Eames) Charles EamesRay Eames Eames House Pacific Palisades 1949, Charles and Ray Eames (Architecture in Detail) James Steele? Eames Address Book (Eames) Lucia EamesCharles EamesRay Eames Ray Charles -- A Man and His Soul (Legendary Performance) Ray Charles? Painting Landscapes With Atmosphere An Artist's Essential Guide Ray Balkwill? The Work Of Charles And Ray Eames A Legacy Of Invention Donald Albrecht? Charles Ray Charles RayPaul Schimmel?Lisa PhillipsCalif.) Museum of Contemporary Art (Los Angeles? Diller + Scofido Eyebeam Museum of New Media / The Charles and Ray Eames Lecture Elizabeth Diller?Ricardo Scofidio?Keith Mitnick? Brother Ray Ray Charles' Own Story Ray Charles?David Ritz? New Hope for the Dead (Vintage Crime/Black Lizard) Charles Ray Willeford?James Lee Burke? Sideswipe A Novel (Vintage Crime/Black Lizard) Charles Ray Willeford?Lawrence Block? Miami Blues (Vintage Crime/Black Lizard) Charles Ray Willeford?Elmore Leonard Winesburg, Ohio Authoritative Text Backgrounds and Contexts Criticism (Norton Critical Editions) Sherwood Anderson?Charles E. Modlin?Ray Lewis White? The Handbook Of Blended Learning Global Perspectives, Local Designs Curtis Jay Bonk?Charles Ray Graham? Bright Minds, Beautiful Ideas Parallel Thoughts In Different Times Bruno Munari, Charles Ray Eames, Marti Guixe And Jurgen Bey Ed Annink?Ineke Schwartz? Gamma-Ray Bursts 4th Huntsville Symposium (Aip Conference Proceedings) Charles A. Meegan?Robert D. Preece?Thomas M. Koshut? Charles Ray Eames 1907-1978, 1912- 1988. Vorreiter der Nachkriegsmoderne Gloria Koenig? Charles Ray A Four Dimensional Being Writes Poetry on a Field of Sculpture Charles Ray The Acoustic Analysis of Speech Ray D. Kent?Charles Read? Ray and Charles Eames Parkett Charles Ray/Franz West (Parkett) Ray ?West? Charles Ray Charles RayLisa PhillipsPaul Schimmel? Constructive Furniture Jean Prouve?Ray EamesCharles Eames Ray Charles Sharon Bell Mathis?George Ford?Eida De LA Vega? Ray Charles Sharon Bell Mathis?George Ford? Ray Charles Man and Music Michael Lydon? Gender Inclusive Game Design Expanding the Market (Advances in Computer Graphics and Game Development Series) Sheri Graner Ray? Ray Charles Sharon Bell Mathis?George Ford? Course Notes and Workbook for Introduction to Sound Acoustics for the Hearing and Speech Sciences Charles E. Speaks?Monica Ray Zobits?Edward Carney? Ray Charles Man and Music Michael Lydon? Where We Stand Voices Of Southern Dissent Jimmy Carter?Charles Bussey?Dan Carter?Connie Curry?Leslie Dunbar?John Egerton?Paul M. Gaston?Sheldon Hackney?Laughlin McDonald?Gene Nichol? Ray Charles And the Birth of Soul (Lucent Library of Black History) Adam Woog? Cockfighter Charles Ray Willeford? California Osha Guide for the Construction Industry Regulations, Sample Plans, Forms H. Ray Kirk?Charles B. Lewis? The Woman Chaser Charles Ray Willeford? The Machine in Ward Eleven Charles Ray Willeford? Fifteen Things Charles Ray Teach Us Eames Office?Keith Yamashita? Man Who Elected Lincoln James Monaghan? Peak District (Official National Park Guide) Roly Smith?Ray Manley? National Park Guide the Peak District (Pevensey National Park 50th Anniversary Guides) Ian Mercer?Roly Smith?Ray Manley? Beggars of Life A Hobo Autobiography (Nabat) Jim Tully?Charles Ray Willeford? Interventions In Oncology (Sir Syllabus) Charles E., Jr., M.D. Ray?Marshall E., M.D. Hicks?Nilesh H., M.D. Patel? Pick-up Charles Ray Willeford? The Second Half of the Double Feature Charles Ray Willeford? The Second Half of the Double Feature Charles Ray Willeford? The Black Mass of Brother Springer Charles Ray Willeford? Uh Huh! The Story Of Ray Charles (Modern Music Masters) John Duggleby? Ray. Die Autobiographie Ray Charles?David Ritz? Ray Charles (Rock Roll Hall of Famers) Mark Beyer? The Difference Charles Ray Willeford? Susannah Spurgeon Free Grace and Dying Love Charles Ray Ray Charles Michael Lydon?Jools Holland? Ray Charles (Black American Series) Norman Winski? I Was Looking for a Street A Memoir Charles Ray Willeford? The Woman Chaser Charles Ray Willeford? Performs Janine Antoni, Charles Ray, Jana Sterbak Judith Tannenbaum? The Shark-Infested Custard A Novel of Crime, Vice, and Sex Charles Ray Willeford? The Black Mass of Brother Springer (Saturday Night Special) Charles Ray Willeford? High Priest of California Charles Ray Willeford? Atlas of Primate Gross Anatomy Baboon, Chimpanzee, and Man Daris Ray Swindler?Charles D. Wood? Dark Metropolis Irving Norman's Social Surrealism Michael Duncan?Charles C. Eldredge?Patricia Junker?Ray Day?Scott A. Shields? Kiss Your Ass Good-Bye Charles Ray Willeford? Michael Ray Charles Michael Ray Charles?Spike Lee?Calvin Reid? Writing Other Blood Sports Charles Ray Willeford? High Priest of California/Wild Wives Charles Ray Willeford? High Priest of California (Novel and Play; Wild Wives) Charles Ray Willeford? Michael Ray Charles, 1989-1997 An American Artist's Work Michael Ray Charles?Marilyn Kern-Foxworth?Don Bacigalupi? The Tarheel Connection An Environmental Romance Charles Ray Arrowhead Pieces Charles Ray Lance A Child's Garden of Evil Charles Ray Wild Wives Charles Ray Willeford? Charles R. Knight Autobiography of an Artist Ray Harryhausen?Ray Bradbury?Charles R. Knight?Mark Schultz?William Stout? The Life of a Network Newsreel Cameraman Charles Ray Ray's Boathouse Seafood Secrets of the Pacific Northwest Ken Gouldthorpe?Charles Ramseyer?Ray s Boathouse (Restaurant)?Angie Norwood Browne? Looking Through Lincoln Cents A Chronology of a Series (Chronology of a Series) Charles D. Daughtry?Ray Knight? Wild Wives and High Priest of California Charles Ray Willeford? Ray Charles Find Another Way! (Defining Moments) Susan Sloate? Shark-Infested Custard (Canongate Crime Classics) Charles Ray Willeford? Ray Charles Michael Lydon? Ray Charles the Birth of Soul Mike Evans? Ray Charles the Birth of Soul Mike Evans? Charles and Ray Eames (Design Monograph) Naomi Stungo? Charles and Ray Eames Naomi Stungo? Grand Street 59 Time (Grand Street , No 59) William S. Burroughs?Mike Davis?Charles RayNaguib Mahfouz?John Szarkowski? The Ray Dream Handbook (Mac and Windows) Craig A. Patchett?John W. Sledd? The Ray Dream Handbook John W. Sledd? Wild Wives Charles Ray Willeford? Foreign Office Architects The 2003 Charles and Ray Eames Lecture Watercolor for All A Practical Guide for Beginners Improvers Ray Campell Smith? English Naturalist from Neckam to Ray A Study of the Making of the Modern World Charles E. Raven? The Way We Die Now (Vintage Crime/Black Lizard) Charles Ray Willeford? The Shark-Infested Custard (Vintage Crime/Black Lizard) Charles Ray Willeford? Myocardial Laser Revascularization Charles R., M.D. Bridges?Keith A., M.D. Horvath?Ray Chu-Jeng Chiu? Ray Charles Young Musician (Childhood of Famous Americans) Susan Sloate?Meryl Henderson? Ray Music from the Motion Picture Soundtrack For Organs, Pianos Electronic Keyboarding (E-Z Play Today) Ray Charles? Ray Music from the Motion Picture Sounddtrack Ray Charles? Ray A Tribute to the Movie, the Music and the Man (Newmarket Pictorial Moviebooks (Hardcover)) Taylor Hackford?James L. White?Linda Sunshine?Jamie Foxx?Timothy Shaner?Nicola Goode? Mrs. C. H. Spurgeon Charles Ray Robert Bechtle A Retrospective Janet C. Bishop?Michael Auping?Jonathan Weinberg?Charles RayRobert Bechtle? John Ray The Naturalist His Life and Works (Cambridge Science Classics) Charles E. Raven? Exploring the X-Ray Universe Philip A. Charles?Frederick D. Seward? Conjure Tales Ray Anthony Shepard?Charles Waddell Chesnutt?John Ross?Clare Romano? Ray Charles (A Crowell Biography) Sharon Bell Mathis?George Ford? Music Listening Today Charles R. Hoffer?Mary Ray, Ph.D. Johnson? Office Automation Charles RayJanet J Palmer? Office Automation A Systems Approach/With IBM 5 1/4 Disk Charles M. Ray?Janet J. Palmer?Amy D. Wohl? Office Automation A Systems Approach Charles M. Ray? Office Automation A Systems Approach Charles M. Ray?Janet Palmer?Amy D. Wohl? Office Automation A Systems Approach Charles M. Ray?Janet J. Palmer?Amy D. Wohl? Closet Desire An Anthology of Hidden Erotica Jason Charles?Stephen Van Scoyoc?Susan Van Scoyoc?Ray Leaning? Ray Charles Sharon Mathis? A Computer Perspective Charles EamesRay EamesGlen Fleck?I. Bernard Cohen?Robert Staples? A Computer Perspective Background to the Computer Age Charles EamesRay Eames The Burnt Orange Heresy (Vintage Crime/Black Lizard) Charles Ray Willeford? Pick-Up (Vintage Crime/Black Lizard) Charles Ray Willeford? Cockfighter (Vintage Crime/Black Lizard) Charles Ray Willeford? Developing Style in Watercolour Ray Campbell Smith? Play Piano With Ray Charles Ray Charles Ray Charles (Piano Transcriptions) Woodturning and Design Ray Key? Eames House, Charles and Ray Eames Charles and Ray Eames (Architecture in Detail) James Steele? Twentieth-Century Houses Frank Lloyd Wright, Fallingwater ; Alvar Aalto, Villa Mairea ; Charles and Ray Eames, Eames House (Architecture 3s) Robert MaCarter? Watercolour for All Ray Campbell Smith? The Concise Ocean Navigator Guide A Study and Revision Aid for the Ray Shorebased Ocean Yachtmaster Course, Complete With Exercises and Test Questi (Concise Navigation) Mike Bowyer? Watercolour Work-Out 50 Landscape Projects from Choosing a Scene to Painting the Picture Ray Campbell Smith? Fresh Watercolour Bring Light and Life to Your Painting Ray Campbell Smith? Ray Campbell Smith's Way With Watercolour Exploring Landscape Painting Ray Campbell Smith? Fresh Watercolour Plusdeo Ray Campbell Smith? Watercolor Work-Out 50 Landscape Projects from Choosing a Scene to Painting the Picture Ray Campbell Smith? Developing Style in Watercolor Ray Campbell Smith? Classic Techniques for Watercolour Landscapes Ray Campbell Smith? Watercolour Plus... Ray Balkwill? Watercolour Plus ... Enhance Your Watercolours With Other Media Ray Balkwill? Ray Campbell Smith's Watercolour Landscapes Ray Campbell Smith? Painting Landscapes with Atmosphere, An Artist's Essential Guide Ray Balkwill? Black-and-White Photography in the Digital Age Tony Worobiec?Ray Spence? Middlemen in English Business, Particularly Between 1660-1760 Ray B. Westerfield? Classic Snooker Ray Reardon? Lawns (Penny Pinchers) Ray Edwards? Ray Reardon's Fifty Best Trick Shots Ray Reardon? Ray Reardon Ray Reardon?Peter Buxton? Wordless Workshop Ray Doty? Fresh Watercolour Bring Light and Life to Your Painting Ray Campbell Smith? Lumbar Spine Surgery Techniques and Complications Arthur H. White?Richard H. Rothman?Charles D. Ray? Central Venous Access Charles E., Jr. Ray? Basketball Brian Coleman?Peter Ray? Powers of Ten A Book About the Relative Size of Things in the Universe and the Effect of Adding Another Zero Philip Morrison?Phylis Morrison?Office of Charles and Ray Eames? Power of Ten A Flipbook Charles EamesRay Eames Powers of Ten A Book About the Relative Size of Things in the Universe and the Effect of Adding Another Zero Philip Morrison?Phylis Morrison?Office of Charles and Ray Eames? Osha Compliance Guide for Medical Employers Jennifer Busick?H. Ray Kirk?Kirk?Charles B. Lewis? Hill 488 Ray Hildreth?Charles W. Sasser? Ray Charles Man and Music Michael Lydon? Charles And Ray Eames Designers of the Twentieth Century Pat Kirkham? Ray Charles "I Was Born With Music Inside Me" (African-American Biography Library) Carin T. Ford? The Works of Edmund Spenser A Variorum Edition Faerie Qveene, Book Five (Works of Edmund Spenser) Edmund Spenser?Edwin Greenlaw?Charles Grosvenor Osgood?Frederick Morgan Padelford?Ray Heffner? Brother Ray Ray Charles' Own Story Ray Charles?David Ritz?Andrew L. Barnes? Brother Ray Ray Charles' Own Story Ray Charles?David Ritz?Andrew L. Barnes? Brother Ray Ray Charles' Own Story Ray Charles?David Ritz?Andrew L. Barnes? Brother Ray Ray Charles' Own Story Ray Charles?David Ritz?Andrew L. Barnes? The Burnt Orange Heresy Charles Ray Willeford? Marco Polo (Junior World Explorers) Charles Parlin Graves?Ray Keane? Ray Charles Voice of Soul (Great Achievers Lives of the Physically Challenged) David Ritz? Drugs, Society and Human Behavior Oakley Ray?Charles Ksir? Drugs, Society and Human Behavior Oakley Stern Ray?Charles Ksir? Drugs, Society and Human Behavior Oakley S. Ray?Charles Ksir? The Works of Edmund Spenser The Faerie Queen (Works of Edmund Spenser) Edmund Spenser?Edwin Greenlaw?Charles Grosvenor Osgood?Frederick Morgan Padelford?Ray Heffner? The Works of Edmund Spenser The Minor Poems (The Works of Edmund Spenser a Variorum Edition, 8) Edmund Spenser?Edwin Greenlaw?Charles Grosvenor Osgood?Frederick Morgan Padelford?Ray Heffner? The Works of Edmund Spenser Index to the Poetry (Works of Edmund Spenser) Edmund Spenser?Edwin Greenlaw?Charles Grosvenor Osgood?Frederick Morgan Padelford?Ray Heffner? The Civil War in the Western Territories Arizona, Colorado, New Mexico and Utah Ray Charles Colton? The Work of Charles and Ray Eames A Legacy of Invention Beatriz Colomina?Joseph Giovannini?Alan Lightman?Helene Lipstadt?Philip Morrison?Phylis Morrison?Vitra Design Museum?Donald Albrecht? Eames Sketchbook (Eames) Charles EamesRay Eames Eames Textile Patterns A Stationery Collection 30 Sheets and 30 Envelopes [Letter Set] http //logbord.lolipop.jp/asin/Books/0811833402/? Charles EamesRay Eames Cafe Purgatorium Dana M. Anderson?Charles De Lint?Ray Garton? Drugs, Society, and Human Behavior Oakley Ray?Charles Ksir? Back There Where the Past Was A Small-Town Boyhood Ray Bradbury?Charles Champlin? The Legacy of Ancient Egypt (Facts on File's Legacies of the Ancient World) Charles Freeman?J. D. Ray? Euv X Ray and Gamma Ray Instrumentation for Astronomy and Atomic Physics 7-11 August 1989 San Diego, California (Proceedings of S P I E) Charles J. Hailey?Oswald H. W. Siegmund? Saint Anthony of Padua Fire and Light (Encounter the Saints Series, 1) Margaret Charles Kerry?Mary Elizabeth Tebo?Ray Morelli? Gold Fever America's First Gold Rush (Georgia History and Culture Series) Ray Charles Rensi?H. David Williams? Soul An Archaeology Readings from Socrates to Ray Charles Phil Cousineau? Soul An Archaeology Readings from Socrates to Ray Charles Phil Cousineau? Drugs, Society, and Human Behavior Oakley Stern Ray?Oakl Ray?Charles Ksir? Drugs, Society and Human Behavior Oakley S. Ray?Charles Ksir? Drugs, Society, and Human Behavior With Powerweb Oakley Ray?Charles Ksir? Drugs, Society, and Human Behavior Oakley S. Ray?Charles Ksir? High Definition Dvd Handbook Producing for Hd-dvd and Blu-ray Disc Mark Johnson?Charles Crawford?Christen Armbrust? When the Boys Came Out to Play Ray Salisbury? Drugs, Society And Human Behavior Charles Ksir?Oakley Stern Ray?CARL L. HART?Charles. Ksir? Drugs, Society and Human Behavior Oakley S. Ray?Charles Ksir? Drugs, Society, And Human Behavior Charles Ksir?Carl L. Hart?Oakley S. Ray? The Illustrator and the Book in England from 1790 to 1914 Gordon N. Ray?Thomas V. Lange?Charles V. Passela? Chicago Architecture Histories, Revisions, Alternatives (Chicago Architecture and Urbanism) Charles Waldheim?Katerina Ruedi Ray?Katerina Ruedi? Chicago Architecture Histories, Revisions, Alternatives (Chicago Architecture and Urbanism) Charles Waldheim?Katerina Ruedi Ray? Advances in X-Ray Analysis Proceedings of the 29th Conference (Advances in X-Ray Analysis) Charles S. Barrett? Birds of the Air Ray Salisbury? Study Guide to Accompany Economics of Social Issues Ansel M. Sharp?Charles A. Register?Paul W. Grimes?Margaret A. Ray? Charles and Ray Eames Designers of the Twentieth Century Pat Kirkham? Charles and Ray Eames Designers of the Twentieth Century Pat Kirkham? Advances in X-ray Analysis Charles S Barrett? Advances in X-ray Analysis Charles S Barrett? Miami Blues Charles Ray Willeford? Advances in X-Ray Analysis (Advances in X-Ray Analysis) Charles S. Barrett?Paul K. Predecki?Donald E. Leyden? Advanced Scanning Electron Microscopy and X-Ray Microanalysis Dale E. Newbury?David C. Joy?Patrick Echlin?Charles E. Fiori?Joseph I. Goldstein? Advances in X-Ray Analysis (Advances in X-Ray Analysis) Charles S. Barrett? Advances in X-Ray Analysis (Advances in X-Ray Analysis) Charles S. Barrett? Advances in X-Ray Analysis (Advances in X-Ray Analysis) Charles S. Barrett? Advances in X-Ray Analysis (Advances in X-Ray Analysis) Charles S. Barrett?John V. Gilfrich?Ron Jenkins?Ting C. Huang?Pred? Scanning Electron Microscopy, X-Ray Microanalysis, and Analytical Electron Microscopy A Laboratory Workbook Charles E. Lyman? Advances in X-Ray Analysis (Advances in X-Ray Analysis) Charles S. Barrett?John V. Gilfrich?Ting C. Huang?Ron Jenkins? Advances in X-Ray Analysis (Advances in X-Ray Analysis) Charles S. Barrett? Advances in X-Ray Analysis (Advances in X-Ray Analysis) Charles S. Barrett?John V. Gilfrich?Ting C. Huang?Ron Jenkins? Advances in X-Ray Analysis Proccedings of the Forty-Second Annual Conference on Applications of X-Ray Analysis Held in Denver, Colorado, August 2-6 (Advances in X-Ray Analysis) John V. Gilfrich?Charles C. Goldsmith? Advances in X-Ray Analysis (Advances in X-Ray Analysis) Paul K. Predecki?D. Keith Bowen?John V. Gilfrich?Charles C. Goldsmith?Ting C. Huang?Ron Jenkins?I. Cev Noyan?Deane K. Smith? Brother Ray Ray Charles' Own Story Ray Charles?David Ritz? Brother Ray Ray Charles' Own Story Ray Charles?David Ritz? Sideswipe Charles Ray Willeford? Scanning Electron Microscopy and X-Ray Microanalysis Joseph Goldstein?Dale E. Newbury?Patrick Echlin?David C. Joy?Charles Fiori?Eric Lifshin? Cafe Purgatorium Dana M. Anderson?Charles De Lint?Ray Garton? New Hope for the Dead Charles Ray Willeford? Sideswipe Charles Ray Willeford? Miami Blues Charles Ray Willeford? New Hope for the Dead Charles Ray Willeford? Justice and the Media Issues and Research Ray Surette? Something About a Soldier Charles Ray Willeford? Way We Die Now Charles Ray Willeford? Architectural Graphic Standards 1993 Cumulative Supplement (Architectural Graphic Standards) Charles George Ramsey?Harold Reeve Sleeper?John Ray Hoke? The Way We Die Now Charles Ray Willeford? Dermatology for Students Ray O. Noojin? The Parent of the Handicapped Child The Study of Child-Rearing Practices Ray H. Barsch? Something About a Soldier Charles Ray Willeford? The Fundamentals of X-Ray and Radium Physics Joseph Selman? X-Ray Imaging Equipment An Introduction Euclid Seeram? X-ray Repair A Comprehensive Guide To The Installation And Servicing Of Radiographic Equipment Joseph J. Panichello? X-Ray Repair A Comprehensive Guide to the Installation and Servicing of Radiographic Equipment Joseph P. Panichello? Sideswipe Charles Ray Willeford? X-ray Repair A Comprehensive Guide To The Installation And Servicing Of Radiographic Equipment Joseph J. Panichello? Handbook of Counselling in Britain Windy Dryden?David Charles-Edwards?Ray Woolfe?British Association for Counselling? Ray Charles Man and Music Michael Lydon? The Shark-Infested Custard Charles Ray Willeford? X-Ray Repair A Comprehensive Guide to the Installation and Servicing of Radiographic Equipment Joseph J. Panichello? Architectural Graphic Standards (9th Edition) Charles Ramsey?Harold Sleeper?John Ray Hoke? Brother Ray Ray Charles' Own Story Ray Charles?David Ritz? New Hope for the Dead Charles Ray Willeford? The Way We Die Now Charles Ray Willeford? Miami Blues Charles Ray Willeford? Architectural Graphic Standards 1995 Supplement (Architectural Graphic Standards) Charles George Ramsey?John Ray Hoke? Traditional Details for Building Restoration, Renovation, and Rehabilitation From the 1932-1951 Editions of Architectural Graphic Standards Charles George Ramsey?John Ray Hoke?John Belle?Harold Reeve Sleeper?Stephen A. Kliment? Architectural Graphic Standards Charles G. Ramsey?Sleeper Harold R. John Ray? Architectural Graphic Standards (Architectural Graphic Standards) Charles George Ramsey?Harold Reeve Sleeper?John Ray Hoke? Architectural Graphic Standards Charles George Ramsey?John Ray Hoke? Architectural Graphic Standards Charles George Ramsey?Harold Reeve Sleeper?John Ray Hoke? Scanning Electron Microscopy and X-Ray Microanalysis Dale E. Newbury?Patrick Kchlin?David C. Joy?Charles E. Lyman?Eric Lifshin?Linda Sawyer?Joseph R. Michael?Joseph I. Goldstein? Exploring Ray Tracing Animation Photorealism, Fractals, 3d Modeling C. Watkins? Eames Chairs (Eames) Charles EamesRay Eames The Collected Memoirs of C. Willeford I Was Looking for a Street Something About a Soldier Charles Ray Willeford? Applications of Low-Energy X Gamma Rays Charles A. Ziegler? X-ray Interpretation for the MRCP Charles R K Hind? The Evolution of X-Ray Binaries College Park, MD October 1993 (Aip Conference Proceedings) Stephen S. Holt?Charles S. Day? Roy Ray John Charles Clark? Office Automation Charles RayJanet J Palmer? You Are the Voice Ray Charles With CD (You Are the Voice) Brother Ray (Raven S) Ray Charles?David Ritz? Lord Charles Wine Guide Ray Alan? Conspiracy and Tragedy of Charles, Duke of Byron George Chapman?George Ray? Brother Ray Ray Charles?David Ritz? Wild Wives (Vintage Crime/Black Lizaed) Charles Ray Willeford? Drugs, Society, and Human Behavior Charles J Ksir?Carl L Hart?Oakley S Ray? The Legacy of Ancient Egypt Charles Freeman?John D. Ray? X-Ray Interpretation for Mrcp Charles Robert Keith Hind? X-ray Interpretation for Membership of the Royal College of Physicians Charles R K Hind? High Priest of California The Novel and a Play Charles Ray Willeford? Charles Ray Interviews by Lucinda Barnes and Dennis Cooper Charles Ray Unchain My Heart The Ray Charles Story (Newmarket Pictorial Moviebooks (Paperback)) James L. White? Cockfighter Charles Ray Willeford? Zero Tolerance (Choice in Welfare) Ray Mallon?William Bratton?Charles Pollard?John Orr?William Griffiths? Brother Ray Ray Charles Own Story Ray Charles?David Ritz? 1, 2 Timothy, Titus Philemon Goals To Godliness Charles Ray Ray Charles Voice of Soul (Great Achievers Lives of the Physically Callenged) David Ritz? The Merrill Studies in Winesburg, Ohio (Charles E. Merrill Program in American Literature) Ray Lewis White? Ray Charles Musician Handbook of Counselling in Britain Windy Dryden?David Charles-Edwards?Ray Woolfe?British Association for Counselling? Ray Charles Soul Man (Newsmakers) Ruth Turk? Ray Charles with the Voices of Jubilation Choir Ray Charles?Jubilation Choir? Watercolour for All Plusdeo Ray Campbell Smith? Eames House An Appreciation of the Work of Charles Ray Eames James Barkeley? Heavy Duty Drivetrains The System and Component Application (S P (Society of Automotive Engineers)) Charles R. Jones? A Marvelous Ministry Charles Ray Planning the New Garden (Penny Pinchers) Ray Edwards? Narrative and the Legal Discourse (Legal Semiotics Monographs) David Ray Papke? Deliver Me from Dallas Charles Ray Willeford? Choosing and Caring for Garden Shrubs (Penny Pinchers) Ray Edwards? 2000X Tales of the Next Milennia (Fantastic Audio) Ray Bradbury?Kurt Vonnegut?Robert A. Heinlein?Harlan Ellison?Richard Dreyfuss?Charles Durning?Arte Johnson? Charles Ray Bruce W Ferguson? Understudy for Death Charles Ray Willeford? Sea Angling from the Shore Ray Forsberg? 2000X Tales of the Next Millennia (Fantastic Audio Series) Fredric Brown?Octavia E. Butler?Karel Capek?Harlan Ellison?Robert A. Heinlein?Moore. C. L.?A. E. Van Vogt?Kurt Vonnegut?Connie Willis?Ray Bradbury? Die Welt Von Charles Und Ray Eames D Albrecht? Ray Charles. What I say. Der Hohepriester des Soul Ray Charles?David Ritz? Eames Fabric Design Journal (Eames) Charles EamesRay Eames Drugs Society and Human Behavior Oakley S. 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Ray Kirk?Charles Lewis?
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Workbook for Electricity Basic Electronics Goodheart-Willcox Pub? Stephen R. Matt? Goodheart-WillcoxPub? StephenR.Matt? ジャンル別? ユーズドブック(洋書)-Engineering Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Reference-Education-Workbooks? Subjects-Science-General Electricity and Basic Electronics Goodheart-Willcox Pub? Stephen R. Matt? Goodheart-WillcoxPub? StephenR.Matt? ジャンル別? ユーズドブック(洋書)-Engineering Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Nonfiction-Education-Technology&DistanceLearning-Computers&Technology? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Education-Technology&DistanceLearning-Computers&Technology? Subjects-Science-General Electricity and Electronics Goodheart-Willcox Pub? Howard H. Gerrish? William E., Jr. Dugger? Richard M. Roberts? Goodheart-WillcoxPub? HowardH.Gerrish? WilliamE.,Jr.Dugger? RichardM.Roberts? ジャンル別? ユーズドブック(洋書)-Engineering Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-ElectricityPrinciples? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-Telecommunications? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-ElectricityPrinciples? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications? Subjects-Science-General Subjects-Science-Physics-Applied? Electricity and Electronics Study Guide With Laboratory Activities (Study Guide With Laboratory Activities) Goodheart-Willcox Pub? Howard H. Gerrish? William E., Jr. Dugger? Richard M. Roberts? Goodheart-WillcoxPub? HowardH.Gerrish? WilliamE.,Jr.Dugger? RichardM.Roberts? ジャンル別? ユーズドブック(洋書)-Engineering Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-ElectricityPrinciples? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-ElectricityPrinciples? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Reference-Education-Workbooks? Subjects-Science-General Electricity and Electronics Goodheart-Willcox Pub? Howard H. Gerrish? William E., Jr. Dugger? Richard M. Roberts? 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D. Moustakas? ElectrochemicalSociety? T.D.Moustakas? ジャンル別? ユーズドブック(洋書)-Engineering Substores-UnknownASINs-36? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Science-General Copper Interconnects, New Contact Metal- Lurgies, Low-k Dielectrics Electrochemical Society? G. S. Mathad? ElectrochemicalSociety? G.S.Mathad? ジャンル別? ユーズドブック(洋書)-Engineering Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Science-General Electrochromic Materials and Applications Proceedings Volume 2003 - 17 Electrochemical Society? A. Rougier? ElectrochemicalSociety? 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Subjects-Science-General Electronics 1 (Quickstudy Reference Guides - Academic) Barcharts Inc? P. S. Neelakanta? BarchartsInc? P.S.Neelakanta? ジャンル別? ユーズドブック(洋書)-Engineering Substores-UnknownASINs-36? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Reference-General? Subjects-Science-General Molecular Electronics Science and Technology (Annals of the New York Academy of Sciences) New York Academy of Sciences? Engineering Foundation (U. S.)? Ari Aviram? Mark A. Ratner? NewYorkAcademyofSciences? EngineeringFoundation(U.S.)? AriAviram? MarkA.Ratner? ジャンル別? ユーズドブック(洋書)-Engineering Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Telecommunications? 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Occupational Electrical Injury An International Symposium (Annals of the New York Academy of Sciences, V. 888) New York Academy of Sciences? Chin-Tu Chen? Raphael C. Lee? Ji-Xiang Shih? Min-Hua Zhong? NewYorkAcademyofSciences? Chin-TuChen? RaphaelC.Lee? Ji-XiangShih? Min-HuaZhong? ジャンル別? ユーズドブック(洋書)-Engineering Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-Industrial,Manufacturing&OperationalSystems-Safety&Health? Subjects-Medicine-Specialties-Surgery-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Industrial,Manufacturing&OperationalSystems-Safety&Health? Subjects-Professional&Technical-Medical-Medicine-Surgery-GeneralSurgery? Subjects-Science-General Subjects-Science-Technology-Safety&Health? 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United Engineering Foundation (U. S.)? Ari Aviram? Mark A. Ratner? Vladimiro Mujica? NewYorkAcademyofSciences? UnitedEngineeringFoundation(U.S.)? AriAviram? MarkA.Ratner? VladimiroMujica? ジャンル別? ユーズドブック(洋書)-Engineering Substores-UnknownASINs-36? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Science-General Molecular Electronics III (Annals of the New York Academy of Sciences) New York Academy of Sciences? Jeffrey R. Reimers? UNITED ENGINEERING FOUNDATION CONFERENCE? Carl A. Picconatto? James C. Ellenbogen? Ranganathan Shashidhar? NewYorkAcademyofSciences? JeffreyR.Reimers? UNITEDENGINEERINGFOUNDATIONCONFERENCE? CarlA.Picconatto? JamesC.Ellenbogen? RanganathanShashidhar? ジャンル別? ユーズドブック(洋書)-Engineering Substores-UnknownASINs-36? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Science-Experiments,Instruments&Measurement-ElectronMicroscopes&Microscopy? Subjects-Science-General Molecular Electronics III (Annals of the New York Academy of Sciences, V. 1006) New York Academy of Sciences? Engineering Foundation Conference on Molecular-Scale Electronics 2002? Jeffrey R. Reimers? UNITED ENGINEERING FOUNDATION CONFERENCE? NewYorkAcademyofSciences? EngineeringFoundationConferenceonMolecular-ScaleElectronics2002? JeffreyR.Reimers? UNITEDENGINEERINGFOUNDATIONCONFERENCE? ジャンル別? ユーズドブック(洋書)-Engineering Substores-UnknownASINs-64? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Science-General Electronic Styles A Handbook for Citing Electronic Information (Electronic Style) Information Today Inc? Xia Li? Nancy Crane? InformationTodayInc? XiaLi? 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Subjects-Engineering-Mechanical-ControlEngineering-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-DigitalDesign? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Mechanical-ControlEngineering-General? Subjects-Science-Mathematics-Applied? Advances in Test Measurement (International Instrumentation Symposium//Instrumentation in the Aerospace Industry) Instrumentation Systems &? International Instrumentation Symposium? InstrumentationSystems&? InternationalInstrumentationSymposium? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-27? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Science-Experiments,Instruments&Measurement-ScientificInstruments? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? 洋書
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Chance and Dice/日本少年 絡み付いた 記憶の糸 昨日より明日を縛る 時の河が流れるのを 見送る こんなはずじゃなかったねと ため息を吐きたくはない 一か八か賭けてみても 悪くはないさ 何が起こるのか 誰もわからない この足で この腕で 確かめたい 自分の世界を Show me the way Chance! 生まれた瞬間 Dice! 賽は投げられた もうゴールまで 終わらないレースを走り抜け Chance! 夢と現実が Dice! 背中合わせでも このストーリー 鮮やかに 彩るよ Take a chance! And don t look back! 未来を賭け Try to throw dice! (Long Ver.) 絡み付いた 記憶の糸 昨日より明日を縛る 時の河が流れるのを 見送る こんなはずじゃなかったね、と ため息を吐きたくはない 一か八か賭けてみても 悪くはないさ 何が起こるのか 誰もわからない この足で この腕で 確かめたい 自分の世界を Show me the way! Chance!生まれた瞬間 Dice!賽は投げられた もう ゴールまで 終わらない レースを走り抜け Chance!夢と現実が Dice!背中合わせでも この ストーリー 鮮やかに彩るよ Take a Chance! 愛のために 夢のために すべてを賭ける人がいる 胸の奥が ざわついてる このままじゃヤダ 何が正しいのか 誰もわからない 運命か 偶然か そんなこと どうでもいいから Take me a way! Chance!明日の行方は Dice!賽の目次第さ そう ゴールまで 地図のない レースを走り抜け Chance!夢も現実も Dice!その時がすべて この ストーリー シナリオの ないドラマ Take a Chance! Chance! Chance! 何が起こるのか 誰もわからない この足で この腕で 確かめたい 自分の世界を Show me the way... Chance!生まれた瞬間 Dice!賽は投げられた もう ゴールまで 終わらない レースを走り抜け Chance!明日の行方は Dice!賽の目次第さ そう ゴールまで 地図のない レースを走り抜け Chance!夢と現実が Dice!一つになるとき この ストーリー 本当の 幕が開く Take a Chance! And don t look back 出会いを駆け!
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http //www.japaninc.com/node/2988 "I love the Mainichi Shimbun online. Sort of." 「私は、ある意味毎日新聞を愛している」 February 26, 2008 J@pan Inc Blog I love the Mainichi Shimbun online. Sort of. Having record of both the English and Japanese language versions of the same articles from the same publication resting side-by-side, only a hotlink away, the site serves as a rather interesting window into how news is tailored to its audience. 私は、毎日新聞オンラインを「ある意味」愛している。同じ新聞社の同じ記事の英語版と日本語版を記録していることで、このサイトはいかにニュースがそのオーディエンスに向けて仕立てられるかの興味深い窓となっている。 Looking at the publication, it seems that there is a fine line between news and entertainment—and the Mainichi’s leaning to the latter undoubtedly boosts their reading figures, particularly on the English site. As Ms Kitanaka has previously noted content is strategically selected and the writing style is self-consciously titillating. This applies to both the Japanese and the English versions but interestingly, there are inconsistencies between the two. 配信記事を見ると、ニュースとエンターテイメントの間には明確なラインがあるが、とりわけ英語版の方では後者のエンタメ志向が疑いの余地なく読者を増やしている。キタナカさんが以前指摘したように、内容は戦略的に選択され、記述スタイルも意識的に心をくすぐるようになっている。これは日本語版も英語版の両方に言えることだが、興味深いことにこの2つの間に不一致がある。 Opening up the English homepage the first thing I noticed was the startling number of articles related to sex crimes (click here for an example), none of which were related to the US military rape case that has been pummeling the headlines as of late. These were all crimes committed by Japanese people, primarily against young females. Clicking on any of the articles not only pulls up the article in question but an onslaught of similar stories under the “related articles.” You can follow these stories to the end of the earth. Yet when I checked out the Japanese versions of these same articles, if they even existed, the number of “related articles” was always significantly less, or entirely nonexistent. 英語のホームページを開くと、最初に気づくのは仰天すべき性犯罪の記事の多さである。このどれも米軍のレイプのケースとは関係ない。これはすべて、日本人により若い女性に対して犯された犯罪である。記事のどれをクリックしても問題の記事だけでなく「関連記事」の下に大量の類似のストーリーを読むことができる。しかし同様の記事の日本語版をチェックしても存在したとしても「関連記事」はいつも少ないか、全く存在していない。 Is it presumed that the Japanese audience doesn’t care to hear about these things? Does everyone know it’s happening and therefore it’s assumed that these stories don’t need to be told? God forbid readers actually have to stare problems in the face day in and day out to the point where they are forced to think critically about their contributing factors on a deeper level. Or、 is it simply that the English editors fall back on the sensationalist tendencies of the media in their home countries? これは日本人の読者がこうした事柄について聞きたいと思わないことを想定しているのか?みんなそれが起こったことを知っていて、そのような話は報道される必要が無いと思われているからだろうか?それとも英語版の編集者が自国のメディアのセンセーショナルな傾向に頼っているということなのか。 Either way, I don’t care for the Mainichi Shimbun as much as I first stated. I lied. In fact, I find it rather difficult to respect a publication that blatantly reports with such extreme discrepancy across its content. But I am glad that it exists and it is entertaining. It’s also an interesting window into the world of journalism and the Janus-faced duality of allegedly bilingual reporting. どちらにしても私は毎日新聞には最初に述べたほど興味がない。そう、嘘をついた。実際、私は内容についてこんなに極端な不一致をもってぬけぬけと報告するような新聞社を尊敬するのは難しいと思う。これはまたジャーナリズムの世界への、そしてバイリンガルなリポートとかいうもののヤヌスの双頭のような二元性への興味深い窓である。 By Justin Potts 翻訳は、Mozuの囀さんのブログを参考にしました。 http //rockhand.cocolog-nifty.com/blog/2008/04/post_6f5f.html
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ゲーム情報(登録されているタグ) シリーズ>Roads of Rome ジャンル>タイムマネージメント ジャンル>戦略系 製作会社>不明 言語>英語 コメント欄へ移動 ゲーム配布ページ 英語 http //www.bigfishgames.com/download-games/10471/roads-of-rome-ii/index.html 日本語 紹介文 Caesar, the governor of Rome, has been poisoned, and there s no potion strong enough in the world of mortals that can cure him of his terrible disease. Caesar s daughter Julia is in despair and Victorius, an honorable general, sets out on a long journey to the kingdom of the Gods. The lands of barbarians are full of dangers, so be careful! Help Victorius find the magic potion that will save Caesar s life in Roads to Rome 2! Incredible gameplay Fantastic storyline All roads lead to Rome! Play Roads of Rome 画像 « » var ppvArray_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc = new Array(); ppvArray_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc[0] = http //w.atwiki.jp/bfgmatome/?cmd=upload&act=open&page=Roads+of+Rome+II&file=en_roads-of-rome-ii-screen1.jpg ; window.onload=function(){ ppvShow_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc(0); }; function ppvShow_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc(n){ if(!ppvArray_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc[n]){ alert( 画像がありません ); return; } ppv_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc$( ppv_img_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc ).src=ppvArray_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc[n]; ppv_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc$( ppv_link_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc ).href=ppvArray_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc[n]; ppv_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc$( ppv_prev_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc ).href= javascript ppvShow_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc( +(n-1)+ ) ; ppv_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc$( ppv_next_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc ).href= javascript ppvShow_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc( +(n+1)+ ) ; } function ppv_0_cb3524054c8f6493d258daae7f0748dc$(){ var elements = new Array(); for (var i = 0; i arguments.length; i++){ var element = arguments[i]; if (typeof element == string ) element = document.getElementById(element); if (arguments.length == 1) return element; elements.push(element); } return elements; } videoプラグインエラー 正しいURLを入力してください。 備考 レス一覧 228 名前: 名無しさんの野望 [sage] 投稿日: 2010/12/20(月) 18 38 31 ID 3T/kFsYY . 226 え?Roads of Rome II 来たの? ありがとう早速ポチって来ます。 realoreでお試ししたけどいくらなんでもまだだろうと思っていたのでうれしい。 farmflenzyn ancient rome もこの分では早く来るかも。 Roads of Rome II は結構進化していてすごく面白かったけどBFに来るまではとグッと 我慢してた。 farmflenzyはちょっとお腹いっぱいだったんだけど雰囲気が今までと違っているので良いよね。 それからお姫様3は期待してもいいのかなぁ。何しろ自分の本命ゲームですから。 現在どこかからお姫様3が出る動きはありますか? 255 名前: 名無しさんの野望 [sage] 投稿日: 2011/03/23(水) 11 56 20.57 ID CdJtoeEJ Roads of Romaの日本語版をYahooで遊び倒したら面白かったのでIIをお魚さんとこで即ポチ。面白いー。 この手のゲームってお姫様とコレしかやったことないんだけど、他にオススメありますか? 256 名前: 名無しさんの野望 [sage] 投稿日: 2011/03/23(水) 12 20 35.06 ID 4/Q2Gimj . 255 完成度が高くてボリューム大なRoyal Envoyいかがすか あと参考に本家英語サイトのBuilding Games ttp //www.bigfishgames.com/download-games/genres/38/building.html Roads of Romaの続編と同じ所が作ったIsland TribeとJack of All Tribes あたりも おすすめかもしれない コメント コメント すべてのコメントを見る トップページに戻る
https://w.atwiki.jp/spellborn/pages/28.html
最終更新日時2009年11月04日 (水) 02時17分20秒 Lv 1First Steps Flailing Arms 野蛮なベルギアスブラザーズ 一匹狼 腹ペコなガード 奇妙な祠 祠の浄化 5匹の小さなショーテン Lv 2Help Your Fellow Man Take Your Pick Turnip Terrors Whack The Dog Your First Assignment The Greatest Recruit Ever Kidnapped! テリアが引き裂いたもの Make Time For Mending I Do Apologize A Questionable Use Of Resources A Brew For Kestel The Kestel Run Unable To Mourn Death To Wolves Less Wolves, More Fetiches Sleepless In Hawk's Landing The Soaked Parchment The Late Reports Got To Get Them All Tavern Restock No Deposit, No Return Lv3Special Delivery The Dinner Party The Lost Invitation Ecological Order Thinning The Pack Question Of Ecology Results And Solutions Assault On The Lumberyard Lumberyard Assignment Report Lv4Probable Cause A Shady Character Motivated Salesmanship Return To Commander Gula A Reluctant Assignment A Coodinated Assault The Death Of An Ousted Fool I Bring A Message Finding Razkam Reporting A Crime Crime Scene Investigating Surface Interrogation To Oust Or Not To Oust Secondary Suspect Grin And Bear It Night After Night The Mauling Lv6A Strange Veteran A Red Shirt テンプレタイトル コメント Lv 1 First Steps サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Commander Dalheart 場所:Parliament/Hawksmouth, 中心部 前提:- 内容:あなたはエンクレイブの自警団に採用された。まずは戦闘修練コースを受けることから始めよう。Razor GateのそばにいるInstructor Theslar Ittersonと話すんだ。Razor GateはForgeの近く。 報酬:- Flailing Arms サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Theslar Itterson 場所:Parliament/Hawks Landing, Razor Gateの近く 前提:First Steps 内容:戦闘の基本を習おう。HackとSlashでPractice Dummyを4体倒す。教官に話を聞く。遠くからShootでPractice Dummyを4体倒す。教官に話を聞く。※Shoot用のPractice Dummyは少し北にある。HackとSlash用のPractice DummyにShootを使用しても倒せないので注意。 報酬:50c 野蛮なベルギアスブラザーズ サブタイトル:ドッキングシーケンス 依頼者:セルスラー=イッターソン 場所:ホークスマウス・ドック, Razor Gateの近く 前提:- 内容:酔っ払いドック作業員のリーダーに話しかける。酔っ払い作業員を痛めつけ、彼の取引許可証を取り上げる。ホークスマウス・ドックの戦闘教官・イッターソンに取引許可証を届ける。 報酬:12c、名声ポイント360 一匹狼 サブタイトル:ドッキングシーケンス 依頼者:セルスラー=イッターソン 場所:ホークスマウス・ドック, Razor Gateの近く 前提:野蛮なベルギアスブラザーズ 内容:石の道を南に行き、廃れたコテージで新兵レリックを捜せ。ウォルフの集団を5匹倒し、レリックを助ける。コテージのレリックに討伐の成功を知らせる。南へ松明を巡り、その先にいるバリスタガードに報告する。 報酬:21c、名声ポイント648 腹ペコなガード サブタイトル:ドッキングシーケンス 依頼者:サマンサ=クーパー 場所:クウィルの森 前提:一匹狼 内容:タイターを狩って、ラプターの肉を6個集める。タイターを狩って、ラプターの皮を4個集める。タイターから矢じりを5個集める。必需品を持って、サマンサ=クーパーの元へ戻る。 報酬:26c、名声ポイント432 奇妙な祠 サブタイトル:ドッキングシーケンス 依頼者:サマンサ=クーパー 場所:クウィルの森 前提:腹ペコなガード 内容:祠の近くで、「黒い影」に関する何かを見つける。祠の近くで奇妙な本を見つけ、持ち帰る。祠の近くで祠のクリスタルを見つけ、持ち帰る。見つけたものをシャードエッジの傍にいるサマンサ=クーパーに届ける。 報酬:20c、名声ポイント432 祠の浄化 サブタイトル:ドッキングシーケンス 依頼者:サマンサ=クーパー 場所:クウィルの森 前提:奇妙な祠 内容:祠のクリスタルを、台座にセットする。祠のモンスターを倒せ。ホークスマウス・ドックの北にいる、戦闘教官・イッターソンの元に戻り、報告する。 報酬:10s、名声ポイント1080 5匹の小さなショーテン サブタイトル:ドッキングシーケンス 依頼者:ルロ 場所:パリアメント, ドックの近くの納屋 前提:- 内容:ルロは近くのアダルトショーテンが増えて気味悪い騒音に困っている。少しぶっ殺すよう頼まれた。アダルトショーテンを5匹倒す。ルロに報告する。 報酬:10s11c、名声ポイント640 Lv 2 Help Your Fellow Man サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:Theslar Itterson 場所:Parliament/Hawks Landing, Razor Gateの近く 前提:Flailing Arms 内容:市民の手助けをするように言われた。農場にいるAbdelmaseh Edaelが助けが必要らしい。Abdelmaseh Edaelの農場はHawksmouthの2つの門を結ぶ道路の近く。 報酬:- Take Your Pick サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:Abdelmaseh Edael 場所:Parliament/Hawks Landing, Farm 前提:Help Your Fellow Man 内容:Turnip(カブ)の収穫を手伝って欲しいらしい。Turnipを3個集めて渡す。 報酬:- Turnip Terrors サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:Abdelmaseh Edael 場所:Parliament/Hawks Landing, Farm 前提:Take Your Pick 内容:Turnipが動物に食われていたようだ。Tanukを3匹倒す。TanukはFarmの近く、たぶん茂みにいる。Tanukの死骸をAbdelmasehに持っていく。 報酬:- Whack The Dog サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:Abdelmaseh Edael 場所:Parliament/Hawks Landing, Farm 前提:Turnip Terrors 内容:Tanukが現れたのは迷い込んだ犬が原因のようだ。Rabid Dogを見つけ倒す。Abdelmasehに話す。HawksmouthにいるCommander Dalheartに報告する。 報酬:50c Your First Assignment サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Commander Dalheart 場所:Parliament/Hawksmouth, 中心部 前提:Whack The Dog 内容:初めての任務を与えられた。Hawksmouthの壁の外をパトロールしているOxford Frecciに話す。Talon Gateの東にあるLumbaryardにいるJathal Boraxxに話す。 報酬:- The Greatest Recruit Ever サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Jathal Boraxx 場所:Parliament/Hawks Landing, Lumber Yard 前提:Your First Assignment 内容:お前みたいなのが英雄になれるわけないだろ。狼と熊を倒して見せろと言われた。Young Wolveを5匹倒す。Young Bearを5匹倒す。Jathal Boraxxにお前の負けだなと話す。Commander Dalheartに報告する。 報酬:1s50c Kidnapped! サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:アルストレ=ペットラ 場所:Parliament/Hawks Landing, Farm 前提:- 内容:AlstreくんのヌイグルミのおおかみMr.Twitchがさらわれた。お姉ちゃんのTeliyaちゃんを問い詰めろ。 報酬:- テリアが引き裂いたもの What Taliya Tore Asunder サブタイトル:ホークスマウスの人々のためにFor Those In Hawksmouth 依頼者:Alstre Pettera 場所:Parliament/Hawks Landing, Farm 前提:Kidnapped! 内容:アルストレは、枕の上にぼろぼろの巻物をみつけた。巻物には次の6つの手がかりが書かれている。1 - 降りるとき、昇るときより軽い場所。2 - ナーリャが頭を休める家。3 - 誰もがあなたの名前と秘密を知っているクラン。4 - 木々が去り、切り株が占める場所。5 - 飲み物が彼に飛んでくる。しかし、彼が去ることはない。6 - 幽霊に買い物ができるなら、この場所に行くだろう。パーツを探し当て、ミスタートゥウィッチのパーツを農場の外にいるアルストレ=ペットラに持ち帰れ。 報酬:- Make Time For Mending サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:Alstre Pettera 場所:Parliament/Hawks Landing, Farm 前提:What Taliya Tore Asunder 内容:Mr.TwitchのかけらをTailorの助手をしているKyrianida Ivaに持って行って直してもらう。Mr.TwitchをAlstreくんに返してあげる。 報酬:- I Do Apologize サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:Enclave Delegate Moyranin Gelori 場所:Parliament/Hawksmouth, House Torqueの前 前提:- 内容:Tavern The Gilded Leafに行きTavern Keeper Kaarlo SerosにEnclave Delegate Moyranin Geloriの客のための準備は整っているか聞く。TavernはHawksmouthの南側のGateの近く。戻ってMoyranin Geloriに報告する。 報酬:30c A Questionable Use Of Resources サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:Eliina Isa 場所:Parliament/Hawksmouth, House Torqueのバルコニー 前提:- 内容:Eliinaからティーパーティーの招待状を4人の友達に届けるよう頼まれた。彼女曰く、Militiaの新人はHawksmouthの困っている人を助けるものよ、ということらしい。Aldenvaultへのトンネル近くにいるAbyea Presblilに渡す。The Gilded Leafの外にいるGisselle Itxaroに渡す。Dockの近くにいるOriana Margoに渡す。High Houseの近くにいるEukene Malandraに渡す。 報酬:- A Brew For Kestel サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:Kestel 場所:Parliament/Hawksmouth, House Torqueの前 前提:- 内容:Tavern The Gilded Leafに行きArvon GrimguzzleにKestelの飲み物はどうなってるか聞く。 報酬:- The Kestel Run サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:Arvon Grimguzzle 場所:Parliament/Hawksmouth, Tavern The Gilded Leafの前 前提:A Brew For Kestel 内容:Kestelの元までFlask of Capsicumelを持っていくよう頼まれた。が、ただ持って行くだけじゃ面白くないんで、3分以内に届けて戻ってくれば褒美はずむということになった。KestelはHouse TorqueとHouse Silverの間にいる。 報酬:50c Unable To Mourn サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:Helma Paldon 場所:Parliament/Hawks Landing, Hunter Camp 前提:- 内容:Helma Paldonは亡くなったおばさんの家のカギを探しているが、骨壷におばさんの灰と一緒に入ってるらしい。しかし墓地に住み着いたYoung Mauribeakのせい取りに行けない。殺して煮て焼いて食って欲しいと頼まれた。Young Mauribeakを8匹倒す。倒して戻ったら、おばさんの骨壷忘れてんじゃないよと言われた。Aunty Paldon s Urnを墓地から回収する。Helma Paldonのところへ持っていく。 報酬:1s50c Death To Wolves サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:Solon Kauko 場所:Parliament/Hawksmouth, Hunter Camp 前提:- 内容:Solon KaukoにShardshipの船長が使うお守りWolf Fetichを作るための狼のしっぽと狼の足を取ってくるよう頼まれた。Wiry Wolf Tailを8個集める。Wolf Pawsを8個集める。Solon Kaukoに持っていく。 報酬:50c Less Wolves, More Fetiches サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:Solon Kauko 場所:Parliament/Hawksmouth, Hunter Camp 前提:Death To Wolves 内容:ここのガードは倒された狼の数を知りたいらしい。Tower Commander Hilnanに報告するよう頼まれた。 報酬:- Sleepless In Hawk s Landing サブタイトル:Hawksmouth Society 依頼者:Levina Taipan 場所:Parliament/Hawks Landing, Hunters Camp 前提:A Questionable Use Of Resources 内容:Levina TaipanはHunterの仕事が忙しい上に犬のSonnyが肉をたくさん欲しがるので眠る暇がなくて困っている。Young Boar Meatを集めてくるよう頼まれた。Young Boarを倒してYoung Boar Meatを10個集める。Levinaに渡す。 報酬:1s The Soaked Parchment サブタイトル:Hawksmouth Society 依頼者:Maeve Conall 場所:Parliament/Hawks Landing, Hunters Camp 前提:Sleepless In Hawk s Landing 内容:Maeve ConallはKestelからある種類の肉を頼まれているが手紙が酒でにじんで読めない。とりあえず若い熊、猪、狼の肉をそれぞれ5つずつ集めて持っていくように頼まれた。Young Bearを倒してYoung Bear Meatを5個集める。Young Boarを倒してYoung Boar Meatを5個集める。Young Wolfを倒してYoung Wolf Meatを5個集める。High House Torqueの前にいるKestelの元へ持っていく。 報酬:3s The Late Reports サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Commander Dalheart 場所:Parliament/Hawksmouth, 中心部 前提:The Greatest Recruit Ever 内容:Commander DalheartはTower Guardたちの怠慢にうんざりしている。Cntral Guard towerのTower Commander Gulaに会い数週間前に送ったレポートについて問い詰めてくる。 報酬:- Got To Get Them All サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Tower Commander Gula 場所:Parliament/Hawks Landing, Central Guard Tower 前提:The Late Reports 内容:Tower Commander Gulaはこれからレポート書くので忙しいようだ。他の全てのコマンドレポートを集めてくるよう頼まれた。Northern Guard TowerのCommander Hilnanからレポートを受け取る。Razorbeak TowerのWatch Guard Uhrnmarからレポートを受け取る。あまりにも遅いので5回も書き直したらしい。Talon Quill TowerのWatch Guard Velmarからレポートを受け取りながらShardshipのマニアックな話を聞かされる。Commander Gulaからレポートを受け取る。Hawksmouthへ向かう途中、Patrol Lead Oxford Frecciからレポートを受け取る。Commander Dalheartへ報告する。 報酬:1s50c Tavern Restock サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:Belgias Brothers Dockworker Luga Lenoir 場所:Parliament/Hawks Landing, Dock 前提:- 内容:いつもの運び屋が病気なのでDeadspell Pale Aleの樽をTavern The Gilded Leafまで届けるよう頼まれた。樽をKaaro Serosに渡す。 報酬:- No Deposit, No Return サブタイトル:For Those In Hawksmouth 依頼者:Kaarlo Seros 場所:Parliament/Hawks Landing, Dock 前提:Tavern Restock 内容:空のDeadspell Pale Aleの樽をBelgius Brothers Dockworkerに返すよう頼まれた。返さないと怒られるそうだ。Belgias Brothers Dockworker Luga Lenoirに樽を渡す。 報酬:50c Lv3 Special Delivery サブタイトル:Howksmouth Society 依頼者:Belgias Brothers Dockworker Luga Lenoir 場所:Parliament/Hawks Landing, Dock 前提:No Deposit, Nor Return 内容:Luga Lenoirは近くの井戸にいる同じBelgias Brosで働く女性Leya Lidorが気になっているが勇気がなくて仕事以外の話ができないでいる。きっかけ作りのためにこのパッケージを届けて欲しいと頼まれた。Leya Lidorにパッケージを渡す。Luga Lenoirに話す。 報酬:1s50c The Dinner Party サブタイトル:Howksmouth Society 依頼者:Oriana Margo 場所:Parliament/Hawks Landing, Dockの近くの井戸 前提:A Questionable Use Of Resources 内容:Oriana Margoは大切なディナーパーティーを開くために必要な肉を集めたい。Hunter Campに行ってMaeve Conallから受け取ってきて欲しいと頼まれた。OrianaのディナーパーティーについてMaeve Conallに話すと私も招待されるんでしょ?招待状はきっと行方不明になってるはず、Orianaに確認してきて。ついでにOrianaの近くの納屋にある在庫を確認してきてと頼まれた。納屋の在庫を確認し、Orianaに話す。 報酬:1s50c The Lost Invitation サブタイトル:Howksmouth Society 依頼者:Oriana Margo 場所:Parliament/Hawks Landing, Dockの近くの井戸 前提:The Lost Invitation 内容:Oriana Margoはどうしたらいいか困っていたがMaeveを招待するよう説得した。Orianaからの招待状をMaeve Conallに届ける。肉を受け取りOrianaに届ける。 報酬:1s50c Ecological Order サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Commander Dalheart 場所:Parliament/Hawksmouth, 中心部 前提:The Greatest Recruit Ever 内容:Netha Boraxxが地域の野生動物に困っているらしい。何をして欲しいのか話を聞くこと。Netha BoraxxはLumberyardにいる。 報酬:- Thinning The Pack サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Netha Boraxx 場所:Parliament/Hawks Landing, Lumberyard 前提:Ecological Order 内容:Netha Boraxxは周辺のイノシシの数と攻撃性の増加に困っている。少し数を減らすよう頼まれた。Boarを6匹倒す。 報酬:50c Question Of Ecology サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Netha Boraxx 場所:Parliament/Hawks Landing, Lumberyard 前提:Thinning The Pack 内容:生息地の減少によりイノシシがいつもと違うものを食べていてそれが変な行動に影響してるのかもしれない。この地域にある不健康な見た目のキノコが怪しい。とってきて欲しい。Aromatic Mushroom Fragmentをとる。Netha Boraxxに持っていく。 報酬:- Results And Solutions サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Netha Boraxx 場所:Parliament/Hawks Landing, Lumberyard 前提:Thinning The Pack 内容:どうやらキノコが原因らしい。残念ながらこれは治せるものではないので数の調整でしのぐしかない。Hunters Campに行きBoar Bait(イノシシの釣り餌)をもらう。Bora BaitをNatha Boraxxに持って行く。 報酬:- Assault On The Lumberyard サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Netha Boraxx 場所:Parliament/Hawks Landing, Lumberyard 前提:Results And Solutions 内容:Boar Baitを使いイノシシが向かってきたら倒すように頼まれた。Bag of Boar Baitを大きな切り株の上に置く。Young Wild Boarを6匹倒す。Natha Boraxxに話す。 報酬:1s50c Lumberyard Assignment Report サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Netha Boraxx 場所:Parliament/Hawks Landing, Lumberyard 前提:Assault On The Lumberyard 内容:Commander DalheartにLumberyardでの働きを報告する。 報酬:Clever Axe、1s50c Lv4 Probable Cause サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Commander Dalheart 場所:Parliament/Hawksmouth, 中心部 前提:The Greatest Recruit Ever 内容:Cntral Guard towerにいるTower Commander Gulaにノートを持って行くよう頼まれた。 報酬:- A Shady Character サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Tower Commander Gula 場所:Parliament/Hawks Landing, Central Guard Tower 前提:Probable Cause 内容:怪しい人物が不法行為を働いているとの報告がある。Dockにいるshadey dockworkerを問い詰めてきて欲しい。必要ならば武力行使もかまわない。結果をHawksmouth DocksにいるEnclave Delegate Theleg Bournbrayに報告すること。 報酬:50c Motivated Salesmanship サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Enclave Delegate Theleg Bournbray 場所:Parliament/Hawks Landing, Dock 前提:A Shady Character 内容:怪しい人物の雇い主Travelling Salesmanを問い詰める。Theleg Bournbrayに報告する。 報酬:- Return To Commander Gula サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Enclave Delegate Theleg Bournbray 場所:Parliament/Hawks Landing, Dock 前提:Motivated Salesmanship 内容:全ての話から推測すると、Oustedの武器が密輸されているようだ。Commander Gulaに報告する。 報酬:- A Reluctant Assignment サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Tower Commander Gula 場所:Parliament/Hawks Landing, Central Guard Tower 前提:Return To Commander Gula 内容:南西の森の中に怪しげなキャンプがある。そこの入り口の目立たたないところにMemory Crystalを置いてくるよう頼まれた。三叉路の脇のしげみに隠れた木箱にMemory Crystalを置く。Commander Gulaの元へ戻る。 報酬:- A Coodinated Assault サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Tower Commander Gula 場所:Parliament/Hawks Landing, Central Guard Tower 前提:A Reluctant Assignment 内容:キャンプは最近ここらで犯罪を起こしているHarmon the Chestcutter率いるOustedのものだった。Brotherhood of Glaiveに入りたいOustedどもがこのHawksmouthの近くで目立つことをやらかしたいんだろう。Harmonにそいつは間違ってると思い知らせてやれ。Harmonを倒す(グループ推奨)。Commander Gulaに報告する。 報酬:3s The Death Of An Ousted Fool サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Tower Commander Gula 場所:Parliament/Hawks Landing, Central Guard Tower 前提:A Reluctant Assignment 内容:Harmon the Cestcutterが倒されたことをCommander Dalheartに報告する。 報酬:50c I Bring A Message サブタイトル:Bloody Murder 依頼者:Jathal Boraxx 場所:Parliament/Hawks Landing, Lumberyard 前提:Ecological Order 内容:Razkamという名の誰かにメッセージを届けるよう頼まれた。RazkamはHawksmouthは南門から道なりにまっすぐ行った格子門がついた家に住んでいる。家の前の人によるとRazkamは帰ってきてないらしい。夕べGilded Leafの酒場にいたそうだ。Gilded Leaf TavarnのKaarlo Serosに話す。 報酬:- Finding Razkam サブタイトル:Bloody Murder 依頼者:Kaarlo Seros 場所:Parliament/Hawksmouth, Tavern The Gilded Leaf 前提:Finding Razkam 内容:Razkamはひどく酔っ払ってビールに濡れたノートを置き忘れたまま誰かと一緒に出て行ったらしい。裏の細い路地に入っていったようだ。路地でRazkamを探す。襲撃者を倒す。Kaarlo SerosにRazkamの死体のことを話す。 報酬:50c Reporting A Crime サブタイトル:Bloody Murder 依頼者:Kaarlo Seros 場所:Parliament/Hawksmouth, Tavern The Gilded Leaf 前提:I Bring A Message 内容:Commander Dalhaertに殺人事件が起きたことを報告する。 報酬:- Crime Scene Investigating サブタイトル:Bloody Murder 依頼者:Commander Dalheart 場所:Parliament/Hawksmouth, 中心部 前提:Reporting A Crime 内容:現場に何か手がかりが残されていないか調査するよう指令を受けた。Razkamの近くの木箱を調べる。Bloodstained KnifeをCommander Dalheartに届ける。 報酬:50c Surface Interrogation サブタイトル:Bloody Murder 依頼者:Commander Dalheart 場所:Parliament/Hawksmouth, 中心部 前提:Crime Scene Investigating 内容:Razkamの遺体のそばで見つかったナイフにはM.D.と読めるシールが付けられていた。DalheartによるとHawksmouthに M.D.という名はMugwum Deloしかいないという。Aldenvaultへのトンネルへ続く道にいるMugwumにナイフについて話す。Mugwumのアリバイを南門にいる Guard Hlobusに確認する。Commander Dalheartに報告する。分岐・犯人はMugwumだ。→To Oust Or Not To Oust・犯人はMugwumではない。→Secondary Suspect 報酬:- To Oust Or Not To Oust サブタイトル:Bloody Murder 依頼者:Commander Dalheart 場所:Parliament/Hawksmouth, 中心部 前提:Crime Scene Investigating; ・犯人はMugwumだ。 内容:Mugwum Deloを追放するため力ずくで南門まで連行しGuard Hlobusに引き渡す。 報酬:Axe of Webs、1s50c Secondary Suspect サブタイトル:Bloody Murder 依頼者:Commander Dalheart 場所:Parliament/Hawksmouth, 中心部 前提:Crime Scene Investigating; ・犯人はMugwumではない。 内容:ノートに書かれた住所へ行きそこに住む人を力ずくで連行する。Commander Dalheartに報告する。 報酬:Snifter of Capicicuca x2 、1s50c Grin And Bear It サブタイトル:Hawksmouth Society 依頼者:Watch Guard Velmar 場所:Parliament/Hawks Landing, Talon Quill Tower 前提:- 内容:Watch Guard Velmar(Shardshipオタク)は地域の熊の増加に困っている。何匹か殺して欲しいんだけど、あんたにできるの?まじで?とか言われたけどやってみせよう。Young Bearを10匹倒す。Velmarに報告する。 報酬:2s Night After Night サブタイトル:Hawksmouth Society 依頼者:Sir Din Bunannon 場所:Parliament/Hawks Landing, Graveyardの高台 前提:- 内容:Sir Din Bunannonの幽霊は自分に何が起きたのかわからず困っている。友達のVorge Pahtonを探して聞いてきてほしいと頼まれた。Vorge Pathonに話す。Sir Dinに何があったのか話す。 報酬:2s The Mauling サブタイトル:Hawksmouth Society 依頼者:Sir Din Bunannon 場所:Parliament/Hawks Landing, Graveyardの高台 前提:- 内容:Sir DinはHwak s Wall南の森を探検中にMaulerという巨大な生物に殺されたことがわかった。Sir DinはMaulerが未だに誰かを襲っているのは心配だと言う。Maulerを倒すよう頼まれた。Maulbeakを何匹か倒しMaulerをおびき出して倒す。Sir Dinに報告する。Vorge Pahtonに話す。 報酬:Cudgel of the Prophet、2s Lv6 A Strange Veteran サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Commander Dalheart 場所:Parliament/Hawksmouth, 中心部 前提:- 内容:Hawksmouthでは十分に名を上げた。Lieutenant Commander StalwartのいるAldenvaultへ行くよう命じられたが、その前に武勲のベテランに会っていくよう言われた。市役所の前にいるVorge Pahtonと話す。記念に服をやるからForgeにいるKyrianida Ivaに調達注文を持っていくよう頼まれる。Kyrianida Ivaからパッケージを受け取りVorge Pathonに渡す。 報酬:Brightscale Shirt (Sleeveless) A Red Shirt サブタイトル:Road Of The Conscript 依頼者:Vorge Pahton 場所:Parliament/Hawksmouth, 中心部 前提:A Strange Veteran 内容:いよいよAldenvaultへと旅立つときがきた。西のトンネルを抜けAldenvault Villageへ行き、Lieutenant Commander Stalwartと話す。 報酬:50c テンプレ タイトル サブタイトル:サブタイトル名 依頼者:クエストの依頼者 場所:シャード名/クエストの依頼者の場所 前提:クエストの前提 内容:クエストの内容 報酬:クエストの報酬 コメント 見づらい?いい書き方あったらテンプレ直しといて。完了したクエスト全部ログ残るからこれ書くのに便利だねえ。 -- 名無しさん (2008-12-12 00 21 07) テンプレありがとうございます。 クエスト名を見出しにしたかったので少し変更させてもらいました。クエストごとにセルの区切れ位置がバラバラなので、もう少し考えてみます。 -- 管理者 (2008-12-15 13 27 16) このクエスト表って大分古いデータ? -- 名無しさん (2009-10-20 14 39 19) 英語名も残しといた方がいいと思う db的な意味で -- 名無しさん (2009-10-22 00 26 32) pukiwikiのようなセル幅固定ができるのかな・・・@@; -- sinc (2009-10-27 23 50 42) Lv別に分けたほうが良いのか、DBの様に繋がりで分けた方が良いのか・・・ -- 名無しさん (2009-10-28 11 20 23) これサブタイトルで括ってみて良い? -- 名無しさん (2009-11-02 23 50 59) toriaezu -- 名無しさん (2009-11-03 23 57 25) とりあえずタイトルや名前、文章を精査してもらえませんかね… -- 名無しさん (2009-11-03 23 58 53) してもらえませんかね」じゃなくて気づいたら自分でしていくのがwikiじゃね -- 名無しさん (2009-11-04 01 25 50) そっくり返すのと、上でスタイルについて要望出してるからワンクッション置いた方がいいだろうという配慮、まあ勝手にやってもいいけど -- 名無しさん (2009-11-04 02 17 20) 名前 コメント
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はじめに・・・ ようこそ、波運怒駅 指定席券売機へ。 ここは自分のHN・CNなどを自己申告で晒していくページです。 ここに書き込んでなきゃ波運怒駅に書き込んだりページ編集したりしてはいけないということもありません。 積極的にネタを仕込む気概さえあれば誰でもネタうぃきの住民なのです。 ハンドルネーム キャラネーム/アバター 加入or非加入 クラス よく使う兵装 ホーム店舗 一言コメント ①上のテンプレをそのままコピーしてメモ帳に貼り付ける ②該当部分を埋める 埋め終わったら一応保存しておくと万が一の時も安全 ③埋めたテンプレをコピーしたら、芳名帳のページを開き、上の編集→このページを編集で編集画面へ ④埋めたテンプレを貼り付ける ⑤プレビューで変になってないか確認、大丈夫なら英数字入力してページ保存をクリック! ⑥サブカードも記録したいなら、メインカードの次の行に下記をコピペ。キーは「~」だ。 うぃきネーム CN/アバター e-AMUSEMENT GATE クラス よく使う兵装 ホーム店舗 何か一言 ねたうぃきの経営はこいつらのしわざだ! ねたうぃきメンバー一覧 肩書き なめー 主な役割 編集者ID 1行AA 管理人 捨て黒鉄道株式会社社長 ページ編集 steelchronicleneta (社長)
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Digital Electronics Through Experimentation A Student Workbook Technical Education Pr? Robert Delp? TechnicalEducationPr? RobertDelp? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-30? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-DigitalDesign? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-DigitalDesign? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Basic Solid State Electronic Circuit Analysis Through Experimentation Technical Education Pr? Lorne MacDonald? TechnicalEducationPr? LorneMacDonald? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-30? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Circuits-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Circuits-General? Direct Current Circuit Analysis Through Experimentation Technical Education Pr? Kenneth A. Fiske? TechnicalEducationPr? KennethA.Fiske? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-30? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Circuits? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Circuits? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Understanding Electronic and Computer Technology Technical Education Pr? Ronald A. Reis? TechnicalEducationPr? RonaldA.Reis? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-30? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Science-Physics-Applied? Subjects-Computers&Internet-ComputerScience-General? Basic Circuit Analysis for Electronics Through Experimentation Technical Education Pr? Lorne MacDonald? TechnicalEducationPr? 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Computational Aspects of Very Large Scale Integration Computer Sci.P.? Jeffrey D. Ullman? ComputerSci.P.? JeffreyD.Ullman? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-30? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Science-Physics-Applied? Microelectronics at Work Productivity and Jobs in the World Economy (Worldwatch Paper, No 39) Worldwatch Inst? Colin Norman? WorldwatchInst? ColinNorman? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-31? Subjects-Business&Investing-Management&Leadership-Production&Operations? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-BusinessManagement-Management&Leadership-Production&Operations? 1985-86 Electronic Industry Telephone Directory/the Desk Top Action Directory (Electronic Industry Telephone Directory) Harris Infosource? 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Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-General? Subjects-Engineering-MaterialsScience-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-MaterialsScience-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-General Subjects-Science-General Subjects-Science-Physics-Applied? Electronic Packaging Materials Science Symposium Held November 27-29, 1984, Boston, Massachusetts, U.S.A. Materials Research Society? E. A. Gress? MaterialsResearchSociety? E.A.Gress? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-31? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Materials Issues in Applications of Amorphous Silicon Technology Symposium Held April 15-17, 1985, San Francisco, California, U.S.A. Materials Research Society? MaterialsResearchSociety? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-31? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Electronic Packaging Materials Science II (Materials Research Society Symposium Proceedings) Materials Research Society? K. A. Jackson? MaterialsResearchSociety? K.A.Jackson? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-31? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-MaterialsScience-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-MaterialsScience-General? Sio2 and Its Interfaces (Materials Research Society Symposium Proceedings) Materials Research Society? Sokrates T. Pantelides? G. Lucovsky? MaterialsResearchSociety? SokratesT.Pantelides? G.Lucovsky? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-31? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Semiconductors? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Semiconductors? Subjects-Science-Physics-Applied? Electronic Packaging Materials Science III (Materials Research Society Symposium Proceedings, Vol 108) Materials Research Society? Ralph Jaccodine? Kenneth A. Jackson? Robert C. Sundahl? MaterialsResearchSociety? RalphJaccodine? KennethA.Jackson? RobertC.Sundahl? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-31? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-MaterialsScience-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-MaterialsScience-General? 4 and 8 Bit Microprocessor Handbook Osborne/McGraw-Hill,U.S.? Adam Osborne? Gerry Kane? Osborne/McGraw-Hill,U.S.? AdamOsborne? GerryKane? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Reference-General? Subjects-Science-Physics-Applied? Emi Control in Computers in Microprocessors Emf-EMI Control? Mardiguan? Emf-EMIControl? Mardiguan? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-31? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Science-General Electrical Engineering Review Manual A Complete Review Course for the P.E. Examination for Electrical Engineers Professional Pubns Inc? Raymond B. Yarbrough? ProfessionalPubnsInc? RaymondB.Yarbrough? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-31? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Science-Physics-Applied? Basic Electronics for Hydraulic Motion Control Penton Media Inc? Jack L. Johnson? PentonMediaInc? JackL.Johnson? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-31? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-Apparatus,Devices&Design? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-Apparatus,Devices&Design? Subjects-Science-General Proceedings of the National Communications Forum, 1987/Vol 41, Book I and Book II (Annual Review of Communications International Engineering Conortium) Natl Communictions Forum? National Communications Forum? NatlCommunictionsForum? NationalCommunicationsForum? ジャンル別? 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